毛尖紫萼藓总蛋白质提取及双向电泳体系的建立

【作者】 张丽丽； 张梅娟； 马天意； 沙伟；

【机构】 齐齐哈尔大学生命科学与农林学院； 齐齐哈尔大学生命科学与农林学院抗性基因工程与寒地生物多样性保护重点实验室；

【摘要】 为开展毛尖紫萼藓(Grimmia pilifera)蛋白质组学的研究,建立适合毛尖紫萼藓蛋白质双向电泳的实验体系,分别采用Tris-酚抽提法和TCA-丙酮法毛尖紫萼藓总蛋白质进行提取,选取蛋白质纯度和浓度皆较高的提取方法;并比较不同pH值的IPG胶条及不同上样量等因素对毛尖紫萼藓蛋白质双向电泳的结果进行分析。结果显示,使用相同质量的毛尖紫萼藓材料时,Tris-酚抽提法获得的蛋白质浓度较高。通过SDS-PAGE电泳分析,发现与TCA-丙酮法相比,Tris-酚抽提法提取的蛋白质条带清晰,数目较多,完整性较好;在进一步的双向电泳检测结果中发现,使用pH范围为3-10的IPG胶条的分离结果中,蛋白质点集中,无法较好的分离,而使用pH范围为4-7的IPG胶条进行双向电泳分离,图谱中的蛋白质点清晰且分布均匀,更适合毛尖紫萼藓的蛋白质组学分析。使用24 cm,pH4-7的IPG胶条作为第一向,毛尖紫萼藓总蛋白质上样量为1 200μg时,蛋白质点数量达到峰值且分离度较高,蛋白质点形状规则,水平和垂直拖尾情况较轻,图像清晰。本研究结果表明,使用Tris-酚抽提法对毛尖紫萼藓蛋白质进行提取,获取的蛋白质质量较高,本研究中建立的毛尖紫萼藓蛋白质双向电泳体系中,电泳分辨率高,双向电泳图谱较好,较适用于毛尖紫萼藓的蛋白质组学研究。更多还原