单颗粒水平脂质纳米药物多参数定量表征新方法

【作者】 陈超翔； 朱少彬； 王硕； 黄天逊； 张文强； 颜晓梅；

【机构】 厦门大学化学化工学院化学生物系谱学分析与仪器教育部重点实验室化学生物学福建省重点实验室；

【摘要】 纳米药物,尤其是脂质纳米药物,具有重要的生物医学应用前景,然而表征技术的匮乏已严重阻碍纳米医药的发展。纳米药物的高度异质性迫切需要发展高通量的单颗粒表征技术。脂质纳米药物粒径和形貌表征的经典手段是冷冻透射电镜(cryo-TEM),但是存在操作繁琐、技术含量要求高、测试价格极其昂贵等不足。脂质纳米药物的研发和质量控制迫切需要高分辨、高通量的日常分析表征技术。本课题利用实验室创建的超高灵敏流式检测技术灵敏、快速、多参数、定量分析的独特性能,通过对单个脂质纳米颗粒散射光和荧光信号的同时检测,建立脂质纳米药物的单颗粒水平表征方法。我们以首个被FDA批准的纳米药物阿霉素脂质体(Doxil)为模型,合成了四种不同粒径及载药量的阿霉素脂质体作为标准品,利用cryo-TEM准确测定其粒径及其分布,利用荧光分光光度计和超高灵敏流式检测装置(highsensitivityflowcytometer,HSFCM)测定每种阿霉素脂质体标准品的平均载药量,通过HSFCM表征建立阿霉素脂质体的粒径与散射光强度,载药量与荧光强度之间的相关工作曲线,并以此对Doxil仿制药(gDoxil)及美国FormuMax公司生产的科研级Doxil(Doxove)进行双参数定量检测,得到测试样本的粒径及其载药量分布,并通过散射与荧光的双参数相关分析,评估样品的载药效率。此外,我们还制备了表面偶联特异性配体的靶向脂质体,通过免疫荧光染色并利用HSFCM的荧光定量表征能力,测定了脂质体表面的单克隆抗体的个数及其分布。超高灵敏流式检测技术将为脂质纳米药物的合成优化、质量控制等提供快速、高效、实用的表征方法。更多还原