热带白腐真菌Tr16菌株高产漆酶液体培养条件的优化

【作者】 郑晓冰； 郭丽琼； 黄子柔； 林俊芳；

【机构】 华南农业大学食品学院生物工程系； 华南农业大学生物质能研究所； 华南农业大学生命科学学院；

【摘要】 漆酶（Laccase）是一种含铜的氧化还原酶,具有较强的氧化还原活性,已广泛应用于环境保护、制浆造纸、食品工业、生物检测等领域。高产漆酶菌株的筛选和构建及其最优产酶工艺的建立是漆酶生产和应用的基础。本研究是在对热带地区高产漆酶菌株筛选的基础上对高产漆酶的白腐真菌Tr16菌株进行液体培养产生漆酶条件的优化。本研究采用单因素（铜离子浓度、铜离子加入时间、碳源、氮源、培养方式）及正交设计方法L9（3³）对Tr16菌株产生漆酶条件进行了优化。结果表明:在单因素实验中,铜离子浓度及加入铜离子的时间对Tr16菌株漆酶分泌的影响很大。当Tr16菌株培养第六天后加入1mmol/L的Cu²⁺,培养18-20天时出现产酶高峰,漆酶活性为21000U/L;而第一天加入铜离子的处理,产酶高峰时漆酶活性只达到9000U/L;不加铜离子的处理,产酶高峰时漆酶活性不足800U/L。麦芽提取物是白腐真菌Tr16菌株产生漆酶的最佳碳源,酶活峰值为42000U/;而酵母膏是白腐真菌Tr16菌株产生漆酶的最适氮源,酶活峰值为52000U/L。静置培养条件下白腐真菌Tr16菌株产生漆酶的峰值只有109U/L,而摇床条件则可以达到11400U/L。采用碳源浓度、氮源浓度、铜离子浓度三个水平三个因素L9（33）的正交试验优化漆酶发酵条件,结果表明,氮源是影响白腐真菌Tr16菌株产生漆酶的最重要因素,铜离子和碳源浓度次之;碳源20g/L,氮源2g/L,铜离子1.5mmol/L是Tr16菌株产生漆酶的最佳条件,根据理论值得出最优组合的漆酶酶活峰值可达到69340U/L。更多还原