双峰驼IgM重链的原核表达及其多克隆抗体的制备

【作者】 李敏； 吴秀萍； 张旺东； 张亮； 何晚红； 李建飞； 李瑞； 火兴民； 刘丽萍； 王雯慧；

【机构】 甘肃农业大学动物医学院；

【摘要】 为获取双峰驼免疫球蛋白M(IgM)重链恒定区的表达产物及抗体,首先找出Gen Bank收录的双峰驼IgM、IgA、IgE、IgG重链恒定区基因序列,比对IgM与IgA、IgE和IgG的氨基酸序列,选取一段差异较大的蛋白序列片段,转换成相对应的基因片段,PCR扩增选取的基因片段,插入pET-28a(+)载体构建重组载体,转化进大肠杆菌BL21,并诱导重组蛋白表达,SDS-PAGE鉴定重组蛋白,后利用纯化的蛋白免疫家兔,制备抗血清,ELISA和Western Blot鉴定获得的血清。结果显示,成功构建了载体pET-28a-IgM,诱导表达的目的蛋白分子量为18.7ku,与预期相符。ELISA方法检测抗血清效价为1:32000,Western Blot结果显示该血清具有良好的反应原性,这表明了双峰驼Ig M兔抗血清的成功制备。更多还原