鲤疱疹病毒2型感染鲫鱼的病理学诊断

【作者】 周瑶佳； 梁天雨； 杨悦耿毅； 汪开毓； 欧阳萍；

【机构】 四川农业大学动物医学院基础兽医系；

【摘要】 【研究目的】2018年11月,四川自贡某养殖场鲫鱼暴发了传染性疾病,导致大规模的死亡,为探究此次疾病病因以及病原对组织器官的病理学损伤,【材料方法】对自然发病鲫鱼进行剖检、细菌学检查、病理组织观察、病毒分离、PCR鉴定、动物回归试验及系统发育分析。【研究结果】病鱼临床主要表现为食欲不振、离群独游、浮头、全身发黑、体表出血等。剖检显示各组织脏器有不同程度损伤,包括鳃丝出血腐烂,肝、脾、肾器官出血、肿胀,鳔点状出血。制作不同组织的石蜡切片,通过HE染色进行组织病理学观察:鳃及肾脏病变最为严重,鳃丝中呼吸上皮细胞肿胀、坏死及脱落,从而导致鳃小片发生粘连融合,炎性细胞浸润;肾脏表现为局灶性坏死,肾小管上皮细胞坏死,肾小球毛细血管扩张,炎性细胞浸润;脾脏出现大量坏死,核染色质边缘化,血管壁纤维细胞坏死,造血系统崩解;肝脏主要表现为空泡变性;心肌有轻微的炎症反应。对脾和肾进行透射电镜观察:在脾和肾中均观察到处于不同时期的病毒颗粒,成熟的病毒颗粒为具有囊膜的球形病毒,病毒颗粒直径为160-220nm,并且观察到病毒在细胞核内复制、组装,符合鲤疱疹病毒2型(Cyprinid herpesvirus2,Cy HV-2)病毒粒子的特征。超微病理主要表现出细胞核萎缩、核染色质边缘化,线粒体肿胀、坏死、嵴断裂,细胞质空泡化等。取病鱼组织匀浆滤菌后接种到鲤上皮瘤细胞(epithelioma papulosum cyprinid cells,EPC)及胖头鲤肌肉细胞(fathead minnow cells,FHM),盲传5代后没有出现细胞病变效应,推测可能与Cy HV-2目前没有特别适合生长的细胞系有关。人工感染试验显示,健康鲫鱼在感染4天后开始出现死亡,8天内死亡率达到峰值,30天内累积死亡率高达80%,并出现与自然患病鲫鱼相同的症状;根据Cy HV-2解旋酶基因片段设计引物进行PCR检测,自然发病鲫鱼以及人工感染鲫鱼均扩增出与预测条带大小366bp相符的阳性条带;将目的片段连接到PMD-19T载体,转化到DH5α感受态细胞中,选取阳性菌落进行测序,对测序结果进行系统发育分析,显示目的序列与Cy HV-2(YZ-01)同源性最高,序列一致性为99%。【结论与讨论】本论文完成了自然感染条件Cy HV-2感染鲫鱼的病理学观察,为Cy HV-2致病机制的研究提供理论和实验依据。更多还原