黄芪多糖通过MDA5/NF-κB信号通路抑制染镉雏鸡外周血液淋巴细胞损伤作用的研究

【作者】 张瑞莉； 谢婉秋； 葛铭； 杨桂君；

【机构】 东北农业大学动物医学学院；

【摘要】 镉(Cd)是一种危害极大的环境污染物,它与炎症反应、氧化应激和细胞损伤相关。黑色素瘤分化相关基因5(MDA5)是动物机体模式识别受体家族的成员之一,本课题组前期研究发现,Cd中毒雏鸡体内鸡MDA5(ch MDA5)表达增强,提示ch MDA5及其信号通路参与Cd引起的损伤过程。黄芪多糖(APS)是从黄芪中提取的具有免疫调节、抗氧化和抗炎作用等生物学活性的一种多糖。目前,还未见有关于APS对动物Cd中毒影响的研究报道。因此,本试验以雏鸡外周血淋巴细胞(PBLs)为研究对象,在建立雏鸡PBLs染Cd模型的基础上,研究APS与MDA5信号通路的关系以及对染Cd雏鸡PBLs的影响及其机制。将分离的雏鸡PBLs分为对照组、10-6mol/L镉组、40μg/m L黄芪多糖组、10-4 mol/LBAY11-7082(NF-κB抑制剂)组、5mg/L anti-MDA5 m Ab组、黄芪多糖+镉组、BAY+镉组、MDA5单抗+镉组。实时荧光定量PCR方法检测MDA5及其信号通路衔接蛋白IPS-1,核转录因子NF-κB以及炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)和白介素6(IL-6)的转录水平;Western-blot方法检测MDA5蛋白水平表达;生物化学法检测丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性;透射电镜观察PBLs的形态学变化。结果发现,ch MDA5在7~42日龄雏鸡PBLs中均有转录和蛋白表达,且不同日龄之间的表达存在差异;APS能够显著抑制染Cd雏鸡PBLs中ch MDA5及其衔接蛋白分子ch IPS-1、核转录因子ch NF-κB以及下游产物细胞因子ch TNF-α、ch IL-1β及ch IL-6的表达;APS可明显抑制Cd所致的雏鸡PBLs活力降低和自噬、凋亡及坏死等超微病理形态损伤,其作用与anti-ch MDA5m Ab和(或)BAY相同;APS可显著提高Cd所致的雏鸡PBLs抗氧化酶活性降低、显著降低Cd所致的MDA水平升高,其作用与anti-ch MDA5 m Ab和(或)BAY相同。结果表明,APS能够通过抑制MDA5/NF-κB信号通路激活而减轻染Cd雏鸡PBLs的细胞损伤、改善染Cd雏鸡PBLs的抗氧化功能。本研究为进一步探讨APS干预镉中毒导致机体损伤作用及机制提供了科学的试验依据。更多还原