PRRSV感染诱导PAM氧化应激及其炎性反应的实验研究

【作者】 朱经国； 罗文涓； 赵怡； 施君； 胡庭俊； 韦英益；

【机构】 广西大学动物科学技术学院；

【摘要】 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是引起猪繁殖与呼吸综合征的病原,其发病特征为引起妊娠母猪晚期流产、产死胎、木乃伊胎和新生仔猪与生长猪出现呼吸障碍和死亡。本研究通过PRRSV-GXNN 1396株体外感染猪肺泡巨噬细胞(PAWs)观察免疫细胞活性、氧化应激、炎性因子分泌水平、蛋白磷酸化水平等的变化,探讨了该病毒株的致病机理,为临床综合防控提供理论依据。方法:(1)采用CCK法检测PRRSV感染后PAMs的细胞存活率;(2)ELISA法检测细胞上清液COX-1、COX-2、IL-6、IL-8、IL-10、IL-1β、IFN-γ、MCP-1和TNF-α因子水平变化以及细胞中NO、ROS、GSSG、GSH、XOD、MPO和i NOS活性的变化;(3)Real-time PCR检测细胞中c-fos、c-jun和AKT mRNA的表达水平;(4)Western-Blotting检测细胞中c-fos、c-jun、AKT、NF-κB p65和P44/42 MAPK磷酸化水平。结果:(1)PRRSV感染可降低肺泡巨噬细胞活性,随着感染时间的增加COX-1、COX-2活性明显上升,XOD、NO、GSH、TNF-α、IL-6和IL-8等炎症因子分泌水平明显提高(P<0.05);MCP-1和IFN-γ等炎症因子分泌水平明显降低(P<0.05),ROS分泌水平极显著降低(P<0.01);(2)随着感染时间的增加,AKT、c-fos、c-junm RNA的表达水平出现不同程度的升高;(3)病毒感染细胞后诱发了强烈的炎症反应,激活了蛋白MAPK、PI3K/Akt和NF-κB磷酸化通路。结论:PRRSV-GXNN 1396感染PAWs能诱导细胞氧化应激并引起细胞炎性因子分泌水平升高,且免疫细胞内磷酸化水平也升高。更多还原