2株NDV的遗传进化分析及其致病性研究

【作者】 白晓； 段淇凡； 丁芳； 陈立保； 张诚； 韩庆安； 董世山； 陈立功； 王学静； 刘聚祥； 樊宝良；

【机构】 河北农业大学动物医学院/农业部动物疫病病原生物学华北科学观测实验站； 河北省动物疫病预防控制中心； 河北省畜牧兽医研究所； 河北农业大学动物科技学院；

【摘要】 1.研究目的:为明确鸡源NDV和鸽源NDV的遗传进化特征和对鸡的致病性。2.材料:鸡源NDV HB/2/16/Ck株和鸽源NDV TJ/1/15/Pi株由河北农业大学兽医病理实验室提供。28日龄NDV抗体阴性雏鸡,由河北保定易县永和养鸡场提供。3.方法:根据GenBank中发表的NDV全基因组序列设计合成引物,相邻引物扩增片段之间有部分核苷酸序列重叠,引物覆盖整个病毒基因组。用RT-PCR方法获取2株NDV的全基因组序列,对其进行比较分析。将30只雏鸡随机分为3组,每组各10只。第1组、第2组鸡经滴鼻、点眼和口服途径分别接种HB/2/16/Ck株、TJ/1/15/Pi株的含毒尿囊液0.1mL/只(约含105个EID50),第3组为空白对照组,接种灭菌生理盐水,0.1m L/只。接种后3组鸡分别隔离饲养,观察2周,每日记录各组鸡的发病状况及临诊症状。各组鸡(濒死、病死、2周后存活鸡人工处死)及时进行剖检、观察并记录大体病变,采取各组鸡脾脏、法氏囊、腺胃、肠道及肾脏等组织器官,用10%中性福尔马林固定液固定,组织按常规制作石蜡切片,H.E染色,光镜下观察组织学变化;同时采集各组鸡脾脏、肺脏和脑,进行NDV的实时荧光RT-PCR检测。4.研究结果:2株病毒的全基因组序列均由15192个碱基组成;HB/2/16/Ck株与27株参考毒株之间核苷酸同源性为72.3%～98.9%,氨基酸同源性为72.6%～98.7%。TJ/1/15/Pi株与27株参考毒株之间核苷酸同源性为72.4%～98.8%,氨基酸同源性为66.4%～91.3%;F基因蛋白裂解位点均为112RRQKRF117。2株分离毒均属于NDV ClassⅡ类,HB/2/16/Ck株属于基因Ⅶd亚型,TJ/1/15/Pi株属于因Ⅵb亚型。致病性试验结果表明,2株病毒感染鸡均表现典型ND的临床症状、剖检病变及组织病变。实时荧光RT-PCR方法可从2株分离毒接种鸡组织中检测出NDV。5.结论与讨论:2株NDV全基因组长度均为15192nt,均属于ClassⅡ类强毒株,分别属于基因Ⅶd亚型和Ⅵb亚型。2株NDV对非免疫雏鸡均具有较强的致病性。更多还原