促红细胞生成素对THP-1细胞TLR4信号的影响

【作者】 吴双； 刘东升； 王友华； 周小江； 谢大泽； 周南进； 谢勇；

【机构】 南昌大学第一附属医院消化研究所； 江西省医学科学院分子医学研究所；

【摘要】 目的:促红细胞生成素(EPO)是红细胞生成的关键调节因子。有研究表明不仅在大脑、肺及心血管中有抗炎作用,EPO受体在巨噬细胞中也有表达,且被认为是全身性保护性细胞因子。目前虽然未见EPO治疗炎症性肠病(IBD)的报道,本研究EPO对巨噬细胞的调控作用及其机制,旨在后续EPO受体是否成为IBD治疗的靶点打下基础。方法:用脂多糖刺激人源性巨噬细胞(THP-1),找出最适浓度及时间,后续用EPO作用于刺激后的THP-1;用实时荧光定量PCR方法检测各组mRNA表达;用Western Blot方法检测各组蛋白表达;细胞培养上清用流式液相多重蛋白定量技术检测各组细胞因子的含量。结果:①不同浓度的LPS刺激THP-1,100ng/ml及200ng/ml LPS刺激THP-1,12h的mRNA表达水平高于同浓度的LPS刺激THP-1 6h及24h,并且100ng/ml LPS刺激THP-1细胞12h的TLR4mRNA的表达量高于200ng/ml LPS刺激THP-1细胞12h的TLR4mRNA的表达量;②LPS刺激THP-1后TLR4、MYD88、NF-κBp65、SOCS3、STAT1蛋白表达显著高于对照组(P<0.05),给与EPO可显著降低LPS刺激后THP-1 TLR4、MYD88、NF-κBp65、SOCS3、STAT1蛋白的表达(P<0.01),EPO对未给LPS刺激THP-1的TLR4、MYD88、NF-κBp65、STAT1和SOCS3蛋白表达无显著影响(P>0.05);③LPS刺激后THP-1培养上清中TNF-α、IL-6、IL-12和IL-17含量显著高于对照组(P<0.01),给与EPO可显著降低LPS刺激后培养上清中TNF-α、IL-6、IL-12和IL-17含量(P<0.05);对IL-10无显著影响(P=0.15),EPO对未给LPS刺激的THP-1的细胞因子分泌无显著影响(P>0.05)。结论:EPO可以抑制LPS刺激后THP-1促炎细胞因子的分泌,其机制可能与抑制TLR4信号通路有关。更多还原