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生长停滞特异基因6对RAW264.7细胞TLR4的影响
【作者】 吴双; 刘东升; 王友华; 周小江; 谢大泽; 周南进; 谢勇;
【机构】 南昌大学第一附属医院消化研究所; 江西省医学科学院分子医学研究所;
【摘要】 目的:生长停滞特异基因6 (growth arrest specific gene6,Gas6)是TAM受体(Tyro3、Axl、Mer)共同的配体;而TAM受体是TLRs负调节因子,可以防止过强的免疫反应给机体带来自身免疫性疾病。研究TAM配体Gas6对巨噬细胞中TLR4信号通路和细胞因子分泌的影响,旨在后续以Gas6为靶点治疗肠道炎性疾病提供理论依据。方法:用脂多糖刺激鼠源性巨噬细胞(RAW264.7),找出最适浓度及时间,后续用Gas6作用于刺激后的RAW264.7;用实时荧光定量PCR方法检测各组mRNA表达;用Western Blot方法检测各组蛋白表达;细胞培养上清用流式液相多重蛋白定量技术检测各组细胞因子的含量。结果:①在三个不同时间点中,24h LPS刺激RAW264.7的TLR4 mRNA表达显著高于6h及12h,在24h,1000ng/ml LPS组TLR4 mRNA表达显著高于100ng/ml及200ng/ml;②在LPS的刺激下RAW264.7的TLR4 mRNA表达水平增高,外源性给予50ng/ml Gas6后,可以抑制LPS激活的TLR4(P<0.001)mRNA表达;③LPS刺激Raw264.7后TLR4、MYD88、NF-κBp65、STAT1和SOCS3蛋白表达显著高于对照组(P<0.05),给与Gas6可显著降低LPS刺激后Raw264.7细胞TLR4和NF-κBp65蛋白的表达(P<0.05),对MYD88、STAT1和SOCS3蛋白表达无显著影响(P>0.05),Gas6对未给LPS刺激Raw264.7细胞TLR4、MYD88、NF-κBp65、STAT1和SOCS3蛋白表达无显著影响(P>0.05)。④LPS刺激Raw264.7后TLR4、MYD88、TRIF、TNF-α和IL-6 mRNA表达显著高于对照组(P<0.05),给与Gas6可显著降低LPS刺激后Raw264.7细胞TLR4、MYD88、TRIF、TNF-α和IL-6 mRNA表达(P<0.05),LPS刺激后对STAT1无显著影响(P>0.05),Gas6对未给LPS刺激的Raw264.7细胞TLR4、TRIF、TNF-α、STAT1和IL-6 mRNA表达无显著影响(P>0.05)。结论:Gas6可以抑制LPS刺激巨噬细胞RAW264.7后TLR4信号通路的激活。
- 【会议录名称】 华东六省一市生物化学与分子生物学会联盟2019年学术与教学交流会摘要集
- 【会议名称】华东六省一市生物化学与分子生物学会联盟2019年学术与教学交流会
- 【会议时间】2019-07-12
- 【会议地点】中国江西宜春
- 【分类号】R392
- 【主办单位】华东六省一市生物化学与分子生物学会联盟(安徽、福建、江苏、江西、山东、上海、浙江)