鹅TRAF6基因的克隆及其功能分析

【作者】 郭亚鑫； 许莹； 孟闯； 耿士忠； 焦新安； 潘志明；

【机构】 扬州大学生物科学与技术学院； 江苏省人兽共患病学重点实验室； 农业农村部农产品质量安全生物性危害因子(动物源)控制重点实验室；

【摘要】 引言:肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAF)家族是具有酶活性的一类重要接头蛋白。TRAF家族在调节先天性免疫应答和获得性免疫应答、胚胎发育和组织环境稳定中发挥着重要的作用。TRAF6是TRAF家族中唯一一个参与了肿瘤坏死因子受体超家族,IL-1R/TLR超家族,TGFβR和TCR信号转导的成员。TRAF6是NF-κB活化的关键激活剂,能诱导IKK复合物的活化,促进炎性细胞因子的表达。本研究克隆了鹅TRAF6基因,并对其序列进行分子生物学分析,同时对鹅TRAF6基因的生物学功能进行了研究。材料与方法 :设计与合成用于扩增goTRAF6的引物序列,从鹅脾脏的cDNA中扩增目的片段,克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),并通过一系列分子生物学软件对goTRAF6基因进行序列分析。将真核表达质粒与荧光素酶报告质粒共转染HEK293T细胞,研究goTRAF6在活化NF-κB信号通路中的作用。选用3日龄小鹅,口服感染1×106 CFU肠炎沙门菌C50336,感染后0.5、1、3、5、7 d随机选取3只鹅采集各组织器官,以荧光定量PCR法检测其中TRAF6以及炎性细胞因子的表达量。结果与讨论:goTRAF6的ORF为1638 bp,编码了一段含有545个氨基酸的多肽片段;goTRAF6蛋白具有典型的TRAF结构,且goTRAF6与鸟类TRAF6的同源性最高,表明TRAF6序列在鸟类中是比较保守的。过表达的goTRAF6在HEK293T细胞中能激活NF-κB信号通路。goTRAF6在鹅的各组织中均有表达,尤其在心脏和肌肉中表达量最高;细菌感染后,goTRAF6表达水平在各组织中均有显著上调,感染1天后goTRAF6的表达量达到峰值,随后缓慢下降。各炎性细胞因子的表达量在感染早期均有显著性上调,其中IL-6和IL-8的表达量上调最为明显。上述结果均表明goTRAF6在天然免疫应答中扮演着重要的角色。更多还原