沉默PD-L1基因对树突状细胞成熟表型及功能的影响

【作者】 施艳梅； 王红梅； 高典； 袁铿； 刘燕玲； 闵亮亮； 闵卫平；

【机构】 南昌大学基础医学院； 江西省医学科学院；

【摘要】 慢性感染或肿瘤发展过程中,因长期反复抗原刺激,可促进抑制性受体/配体(如CTLA-4/B7,PD-1/PDL1/2,TIM-3/Galetin-9,LAG-3/MHCⅡ等)表达,诱导负性免疫调控,抑制T细胞功能,在肿瘤免疫耐受中起重要作用。那么阻断树突状细胞PD1/PD-L1的之间的相互作用可促进肿瘤相关抗原特异性CD8+T细胞增殖能力、细胞毒性作用,并导致Th1型细胞因子增多,从而抑制了肿瘤的生长。目的 :检测沉默PD-L1基因对小鼠骨髓来源树突状细胞(DC)表型和功能的影响。方法:1.构建PD-L1的小干扰RNA(siRNA),应用lipofectamin2000转染C57BL/6小鼠骨髓来源DC细胞,RT-qPCR检测PD-L1沉默效率,流式细胞仪检测基因沉默后DC成熟表型的变化;沉默后的DC与同种异体小鼠脾脏T细胞混合培养,CCK8法检测DC刺激T细胞增殖情况,ELISA检测混合培养上清IL-2、TNF-α的细胞因子分泌,Annexin V法检测CD4+、CD8+T细胞的凋亡,DC刺激的T细胞与小鼠Lewis肺癌细胞LLC共培养,LDH试剂盒检测T细胞对LLC细胞的细胞毒作用。结果 :1.PD-L1 siRNA转染小鼠DC后,基因沉默效率达到68%,转染si-PDL1可上调DC细胞的成熟表型MHC-Ⅱ、CD80和CD86表达。基因沉默后的DC细胞可以促进T细胞增殖(P<0.001),促进分泌IL-2、TNF-a(P<0.001),抑制CD4+、CD8+T细胞的凋亡(P<0.001),促进对LLC细胞的杀伤作用。结论 :si-PDL1可以促进DC成熟,进而促进T细胞增殖,促进细胞因子IL-2、TNF-α的分泌,抑制CD4+、CD8+T细胞的凋亡,促进对LLC细胞的杀伤作用。si-PDL1可以作为要一个新的治疗方法,通过抑制PD-1/PD-L1信号通路使机体恢复抗肿瘤免疫能力,达到治疗肿瘤的目的。更多还原