鞭毛蛋白活化小鼠BMDCs过程中相关microRNAs的筛选、鉴定与功能研究

【作者】 康喜龙； 焦扬； 周莹莹； 郭亚鑫； 焦新安； 潘志明；

【机构】 扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室； 农业部农产品质量安全生物性危害因子(动物源)控制重点实验室； 农业与农产品安全国际合作联合实验室；

【摘要】 树突状细胞(dendritic cells, DCs)是一类重要的免疫细胞,连接着天然免疫应答和获得性免疫应答。鞭毛蛋白作为一种重要的TLR配体,可以通过与DCs表面的TLR5结合,诱导炎性因子的产生,启动宿主的抗感染免疫。MicroRNA (miRNA)是一类具有转录后水平调控作用的非编码RNA,可调控DCs的成熟、分化以及功能等。但是miRNA在鞭毛蛋白活化DCs过程中的调控作用未见报道。本研究以rmGM-CSF和rmIL-4体外诱导C3H/HeJ小鼠骨髓来源的树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells, BMDCs)为模型,探究miRNA在鞭毛蛋白诱导DCs活化过程中的调控功能。以鞭毛蛋白FliC刺激BMDCs,FACS检测结果显示FliC可诱导细胞表面分子CD80、CD86的表达水平的上调;qRT-PCR结果显示FliC可诱导IL-1β、IL-6、IL-12 p40、TNF-α等炎性因子转录表达水平的上调;ELISA结果显示FliC可诱导BMDCs分泌明显高水平的IL-12p40(p<0.001),表明FliC可诱导BMDCs的活化成熟。以miRNA芯片高通量筛选FliC活化BMDCs过程中差异表达的miRNAs,结果显示,与未刺激组相比,共有4个差异表达的miRNAs,且均为下调表达;qRT-PCR验证芯片结果,结果表明mmu-miR-193-5p和mmu-miR-5112的表达水平与芯片结果一致,表达水平发生显著性下调(p <0.05)。以miR-5112为研究对象,预测其靶基因,结果显示IKKγmRNA 3’UTR包含有miR-5112的靶结合位点;荧光素酶报告载体实验表明miR-5112可以直接靶向IKKγmRNA 3’UTR。miR-5112的过表达实验结果显示miR-5112 mimics可以显著抑制内源性IKKγ的表达(p <0.05);且miR-5112的过表达能够引起细胞上清中IL-12 p40和IL-6含量的显著降低(p <0.05)。总之,我们的结果表明miR-5112在鞭毛蛋白活化DCs过程中表达水平发生下调,其可通过靶向IKKγ调控鞭毛蛋白诱导的炎性应答,miR-5112可作为鞭毛蛋白诱导DCs活化过程中的重要调控因子。更多还原