DHX34影响肝癌免疫原性的作用研究及初步机制探讨

【作者】 田红卫； 张冲宇； 孙晋； 张少颖； 杨岚； 纪泛扑； 孔光耀； 杨军； 李宗芳；

【机构】 西安交通大学第二附属医院生物诊断治疗国家地方联合工程中心；

【摘要】 目的 :肝癌手术切除率低,术后易复发转移,化疗效果不理想等原因,导致肝癌死亡率居高不下。肿瘤免疫负调控抗体疗效显著,但其临床应答率仅为15%-25%,因此提高肿瘤免疫负调控抗体治疗的临床应答率和敏感性,对于晚期恶性肿瘤患者的治疗具有重大意义。肿瘤免疫原性可以影响免疫治疗的敏感性和应答率,而关键基因的基因突变会导致的肿瘤突变负荷增加,增强肿瘤免疫原性,但其具体作用和机制尚不明确。本项目拟筛选影响肝癌免疫原性的关键突变基因并深入探讨其具体作用机制。方法 :本项目拟首先对肝癌患者组织样本进行全外显子组测序,结合生物信息学分析预测影响肝癌免疫原性的关键基因。其次通过流式细胞术、液相芯片等技术体外研究关键基因在肝癌中的生物学和免疫学功能。再次运用RNA-seq、蛋白芯片、免疫共沉淀等技术在体外阐明具体作用靶点及信号通路,最后利用基因敲除鼠模型进一步体内明确关键基因影响肝癌免疫原性并增强免疫负调控抗体治疗敏感性的作用。结果:我们前期在肝癌病例中通过全外显子组测序筛选到DHX34,DLAT,PCBP2, AIMP2,A1BG,PCDH1,RTCA,NUDCD1,ALDH1L1等基因存在高频突变,通过生物信息学分析及体外免疫原性验证,发现DHX34第251位(K251M)存在突变,且合成DHX34突变肽可明显促进T细胞活化。肝癌中DHX34与正常组织中相比呈高表达,且其高表达与病人生存期呈负相关。DHX34高表达与GranzymePerforin、IFN-γ、CCL5、CCL9等炎性因子、趋化因子分泌呈负相关。DHX34低表达与T,B,DC等炎性细胞浸润呈正相关。结论 :肝癌组织中DHX34在第251位(K251M)存在突变且DHX34高表达与病人生存期,趋化因子和炎性因子分泌负相关。DHX34低表达与肿瘤中炎性细胞浸润负相关。DHX34突变可以影响肝癌免疫原性,可能会提高肝癌免疫负调控抗体的敏感型和应答率。本研究将为肝癌免疫治疗提供新的理论基础和治疗靶点。更多还原