番茄溃疡病病原菌的分离与鉴定

【作者】 苏晓梅； 刘淑梅； 王施慧； 吕宏君； 郎丰庆； 侯丽霞；

【机构】 山东省农业科学院蔬菜花卉研究所山东省设施蔬菜生物学重点实验室国家蔬菜改良中心山东分中心；

【摘要】 番茄溃疡病是一种由细菌侵染引起的维管束病害,该病害在番茄的整个生长发育期均可发生。近年来溃疡病在番茄繁种及生产中发生严重,种子及种苗带病较多,对番茄生产造成了严重影响,许多国家已将其列为检疫性病害。对番茄溃疡病病原菌进行鉴定以及致病性测定,明确不同来源番茄溃疡病菌致病力差异,不仅有助于探索该病原菌的多态性,也可为番茄抗溃疡病种质资源筛选、种子与种苗检测、田间预防等提供科学依据。对山东省内不同地区番茄溃疡病发病情况进行调查,采集具有典型症状的病样,采用组织分离法分离纯化病原菌,并对其进行形态学观察、分子生物学鉴定和致病性测定。本试验中共分离获得8个菌株,其在细菌筛选培养基523上的形态基本相同,菌落呈凸圆形,不透明,淡黄或白色,平滑,粘稠状,边缘无锯齿,直径1～3 mm,显微观察细菌体短杆状棍棒形。对分离获得的8个菌株使用溃疡菌特异性引物ClaF1/ClaR2(中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2568-2010番茄细菌性溃疡菌检疫鉴定方法)进行PCR检测,均能扩增出250 bp左右的单一条带,而对照无条带。使用特异引物Cmm5/Cmm6对病原菌基因组DNA进行PCR扩增和测序,并在NCBI中使用Blast程序进行比对,结果与番茄溃疡病菌(Clavibactermichiganensissubsp.michiganensis,Cmm)相似性达到99%以上。将分离获得的8个病原菌菌株使用打顶法对Moneymaker番茄幼苗进行回接,植株在接种7～14 d后表现出典型的溃疡病症状,但接种不同菌株的植株病症程度有所不同。以上结果表明采集于不同地区番茄病样的8个分离菌株均属于溃疡病菌Cmm,但其致病力有所不同。该研究可为番茄溃疡病防治以及番茄抗溃疡病种质资源筛选提供科学依据。更多还原