红芽芋茎尖脱毒、分子检测及试管芋诱导研究

【作者】 刘星月； 李慧英； 王葡萄； 曹天旭； 陈欣； 朱强龙； 单楠； 孙静宇； 黄英金； 周庆红；

【机构】 江西农业大学农学院；

【摘要】 芋由于长期无性繁殖,导致其植株病毒积累,种性退化。通过茎尖脱毒组织培养可以获得去病毒植株,恢复芋原有优良种性;试管芋诱导可解决脱毒苗移栽成活率低、易分化等问题,有效提高脱毒种芋的推广应用。以江西省特色优良芋品种红芽芋为材料,用0.1%HgCl2分别消毒6、8、10 min,将芋茎尖剥离至0.2、0.5、0.9 mm进行脱毒培养。设计芋花叶病毒(Ds MV)、黄瓜花叶病毒(CMV)、芋羽化斑驳病毒(TFMoV)引物,通过RT-PCR检测得到芋脱毒苗。同时设置不同浓度的6-BA、NAA和不同浓度蔗糖(3%、6%、8%、10%)配比,筛选芋茎尖脱毒最佳培养基、芋增殖最佳培养基、试管芋诱导最佳培养基,并在此基础上设置不同温度(20、25、30℃)、不同光照条件(与黑暗对比)以及不同移栽基质(草炭︰蛭石=2︰1,草炭︰营养土=1︰1)筛选芋最佳生长条件,构建了芋脱毒快繁技术体系。研究结果表明,最佳消毒时间为0.1%HgCl2消毒8 min;无菌环境下剥取0.2～0.3 mm茎尖进行离体培养,茎尖成活率达70.83%以上,分子检测,脱毒苗中未发现Ds MV、CMV、TFMoV等主要病毒;在无菌环境下茎尖剥离0.9 mm时,茎尖成活率达82.35%,分子检测到Ds MV脱毒率达60%,未检测到CMV和TFMoV病毒。筛选到芋茎尖脱毒培养最佳培养基为MS+2 mg·L-16-BA+0.5mg·L-1 NAA+3%蔗糖;脱毒苗增殖最佳培养基为MS+1 mg·L-1 6-BA+0.5 mg·L-1 NAA+3%蔗糖;试管芋诱导最佳培养基为MS+1.0 mg·L-1 6-BA+0.5 mg·L-1 NAA+7 g·L-1琼脂+8%蔗糖。培养条件为温度25℃,光照4 000 lx,14 h·d-1。脱毒苗与试管芋的最佳移栽驯化基质为草炭+蛭石(2︰1),成活率达97.8%。茎尖脱毒快繁体系的建立为芋的种质保存、种性复壮提供了的技术支撑。更多还原