PEI载基因阳离子脂质微泡的制备方法及其表征

【作者】 邓诚； 陈逸寒； 张丽； 谢明星；

【机构】 华中科技大学同济医学院附属协和医院； 湖北省分子影像重点实验室；

【摘要】 目的制备一种新型的阳离子超声脂质微泡,评价其理化性质、载基因能力以及体内、外显影效果。方法按一定比例将二硬脂酰磷脂酰胆碱（DSPC）、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000（DSPE-PEG2000）、stearic-pei600溶解于氯仿后,采用薄膜-水化和机械振荡法制备一种载基因阳离子脂质微泡,光学显微镜观察其形态、Delsa^TM Nano纳米粒度及Zeta电位分析仪测量其粒径分布及zeta电位等物理特性,并观察平均粒径、电位在一定条件下随时间（0.5小时、1小时、2小时、4小时、8小时）变化情况;红细胞计数板测定浓度随时间（1天、3天、7天）的变化,紫外分光光度计检测其载质粒的量,采用自制水囊超声造影评价其体外显像效果。体内经大鼠尾静脉注射稀释后阳离子微泡0.3ml（约1×10⁸个）,Philips IU22 L12-5探头观察其在大鼠心腔内显像效果,并进行定量分析。结果所制备的阳离子微泡为乳白色液体,光镜显示形态规则,无明显聚集现象,稳定性好。平均粒径约（1450.9±70.8）nm,平均表面电位约为（33.53±1.30）mV,浓度约2.95³.35×10⁹个/ml。静置4小时内微泡的粒径、电位无显著变化（P>0.05）,7天内微泡的浓度无明显变化（P>0.05）,阳离子微泡最大载质粒量达3ug/10⁸个微泡。体外实验自制水囊造影结果显示阳离子微泡浓度约1×10⁸/ml时显影效果最佳,随着微泡浓度的下降,增强效果逐渐减弱。体内实验证实阳离子微泡可使大鼠心腔显影明显增强,约3秒开始显影,达峰时间约为10秒,最大强度值约16.6 dB,持续增强时间超过10分钟。结论本课题组成功制备新型阳离子脂质微泡,性质稳定,可成功搭载质粒,并且造影效果良好,有望为超声可视化介导靶向基因传递提供一种新的载体。更多还原