重组野生大豆GsSnRK1激酶蛋白的表达和纯化及功能分析

【作者】 刘圆明； Thuy Nguyen Minh； 张航； 刘思妤； 尤宏光； 肖佳雷； 李强； 丁晓东；

【机构】 东北农业大学生命科学院农业功能基因重点实验室；

【摘要】 蔗糖非发酵型蛋白激酶(sucrosenon-feimentingI-relatedproteinkinase,SNRK)是广泛存在于植物的一类Ser/Thr类蛋白激酶,参与植物体内多种信号途径的转导,在植物的抗逆境生理过程中扮演了重要角色。SnRK家族已经高度进化并分化成SnRK1、SnRK2和SnRK3亚科。其中SnRK1蛋白激酶在能量平衡、激素感知、抗逆性、代谢、生长和发育过程中都起着核心作用。然而,在野生大豆中,SnRK1激酶(定义为GsSnRK1s)的功能在很大程度上还是未知的。植物中的蛋白激酶通过磷酸化和去磷酸化在调节ABA信号传导、能量缺失反应和非生物胁迫反应过程中有着重要的作用。在本实验中采用对盐碱具有高度抗性的野生大豆为材料,分别将GsSNRK,GKIK,ABF2基因插入pET32b质粒中构建重组质粒,重组质粒经序列分析正确后,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达重组融合蛋白,对表达产物进行SDS-PAGE电泳和Western blot检测,通过Ni-NTA亲和层析柱纯化融合蛋白;并进行融合蛋白的体外磷酸化实验。对SnRK蛋白激酶进行研究有助于提高我们对该类激酶新功能的认识,并揭示SnRK激酶参与的与非生物抗性相关的、新的和未知的信号传导途径。植物中的蛋白激酶通过磷酸化和去磷酸化在调节ABA信号传导、能量缺失反应和非生物胁迫反应过程中有着重要的作用。更多还原