糖原合成酶激酶3β活性抑制通过激活PPARα对急性肝衰竭小鼠发挥保护性作用

【作者】 时红波； 时红林； 张向颖； 陈德喜； 任锋； 段钟平；

【机构】 首都医科大学附属北京佑安医院北京市肝病研究所；

【摘要】 目的用D-氨基半乳糖/脂多糖(D-GalN/LPS)诱导的小鼠急性肝衰竭模型,探讨糖原合成酶激酶3β(GSK3β)和过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)信号通路在急性肝衰竭中的作用及其机制。方法以C57BL/6小鼠为研究对象,腹腔注射D-Gal N/LPS建立小鼠急性肝衰竭模型。用SB216763抑制GSK3β活性,用PPARαsiRNA抑制PPARα表达。蛋白免疫印迹实验检测小鼠中PPARα蛋白表达情况。观察小鼠肝组织病理变化情况以评价肝脏损伤情况,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)评价肝脏功能。实时荧光定量PCR检测肝组织中肿瘤坏死因子(TNF)α、白细胞介素(IL)-1β、IL-12p40mRNA和PPARα基因表达水平。多组样本均数的比较采用单因素方差分析,方差齐者用LSD检验,方差不齐者用Games-Howell法。结果在D-GalN/LPS诱导的肝衰竭小鼠中,抑制GSK3β活性促进了PPARα的mRNA(0.29±0.05 vs 0.17±0.02,F=13.18,P=0.00)和蛋白(0.79±0.05 vs 0.15±0.04,F=301.36,P=0.00)表达水平。在D-GalN/LPS诱导的急性肝衰竭小鼠中,抑制GSK3β活性减轻了小鼠肝脏出血、炎症和坏死,降低了血清肝功能指标ALT(572±127.8 vs 1627±412.4,F=25.16,P=0.000)、AST(479.2±229.2 vs1359±534.8,F=12.96,P=0.001)水平,也降低了肝组织中炎症因子TNFα(F=32.17,P=0.00)、IL-1β(F=11.57,P=0.005)、IL-12p40 (F=14.17,P=0.015)mRNA表达水平。抑制PPARα表达逆转了GSK3β活性抑制带来的肝保护性作用,表现在肝脏出血、炎症和坏死加重,血清肝功能指标ALT(1433±464 vs 708.7±196.2,F=25.16,P=0.001)、AST(1361±583.2 vs 352.7±177.4,F=12.96,P=0.000)水平升高,肝组织中炎症因子TNFα(F=32.17,P=0.00)、IL-1β(F=11.57,P=0.024)、IL-12p40 (F=14.17,P=0.001)mRNA表达水平升高。结论在D-GalN/LPS诱导的小鼠急性肝衰竭中,GSK3β-PPARα-炎症因子通路是重要的分子信号通路之一,抑制GSK3β活性可能通过激活PPARα抑制炎症因子对急性肝衰竭小鼠发挥保护性作用。更多还原