基于stat3通路探讨猪苓多糖对M1亚型巨噬细胞吞噬及其作用机制

【作者】 刘春萍； 周昌园； 谭庆龙； 张娴； 曾星；

【机构】 广州中医药大学第二附属医院；

【摘要】 目的猪苓是临床上常用中药材之一,性甘味淡,归肾、膀胱经,主利尿渗湿的功效。猪苓多糖类是其主要化学成分之一。实验证明猪苓多糖对动物移植性肿瘤有抑制作用,具有辅助抗肿瘤活性。本团队前期研究发现猪苓多糖能够增加大鼠巨噬细胞的吞噬功能、体外NO释放及共刺激分子和表面分子CD14/TLR4、CD40,CD16/32等的表达。鉴于上述结果,本研究以巨噬细胞RAW264.7为载体,通过IFN-γ诱导其成为M1亚型巨噬细胞,研究猪苓多糖对M1细胞的摄取功能及其可能的作用机制。目的是基于stat3通路研究猪苓多糖(PPS)对γ-干扰素(Interferon-γ,IFN-γ)活化的巨噬细胞炎症模型细胞的吞噬作用及其作用机制。方法巨噬细胞株(RAW264.7)以1×104个/孔接种于96孔培养板,用不同浓度的猪苓多糖干预24 h,MTT法测定细胞的存活率。RAW264.7细胞以2.5×105个/孔接种于24孔培养板,将细胞分为空白组、IFN-γ模型组、IFN-γ加猪苓多糖组(250μg/mL),每组4个复孔,给予IFN-γ(100ng/mL)刺激3 h,继而猪苓多糖干预24 h,中性红法测定细胞的摄取活性。1×106个/孔接种于6孔板培养,将细胞分为空白组、IFN-γ模型组、IFN-γ加猪苓多糖组(250μg/m L)。RAW264.7细胞给予IFN-γ刺激3 h,继而用猪苓多糖干预共刺激6 h。收集细胞,Western blotting法检测细胞p38丝裂原活化蛋白激酶(p38),细胞外信号调节蛋白激酶42/44(ERK42/44),信号传导与转录激活因子3(stat3)和应激活化蛋白激酶(JNK)的表达。结果与对照组相比,IFN-γ诱导模型组细胞因子IL-1β和IL-10 m RNA表达量显著升高(P<0.05),模型建立成功。给予猪苓多糖干预后,猪苓多糖可增加由IFN-γ诱导的巨噬细胞的形态分化,摄取活性以及蛋白p38,ERK42/44,JNK,stat3磷酸化的表达(P<0.05)。结论猪苓多糖可以增强IFN-γ诱导的摄取活性,猪苓多糖能够增强IFN-γ活化的巨噬细胞pp38、p-stat3蛋白的表达,提示了猪苓多糖可能通过激活P38和stat3通路提高IFN-γ活化的巨噬细胞的吞噬功能,其信号通路可能MAPK-STAT3有关。更多还原