saRNA激活P53抑制人膀胱肿瘤细胞的增殖和转移

【作者】 汪成合； 张庆松； 盖强强； 李传昌； 陈忠；

【机构】 上海交通大学医学院附属瑞金医院泌尿外科； 华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科；

【摘要】 方法:寡聚合苷酸和慢病毒技术用于使dsP53-285在膀胱癌细胞中过表达。采用RT-PCR和western blot分别检测相关基因mRNA和蛋白的表达。细胞增殖试剂盒、克隆形成实验、流式、transwell小室法以及瘢痕实验用于检测在体外膀胱癌细胞中增殖和侵袭转移的变化。动物模型构建用于检测体内膀胱癌细胞的增殖和转移。结果:转染dsP53-285到人膀胱癌细胞系T24和EJ细胞中后能够通过与启动子结合稳定激活野生型P53的表达。而且,dsP53-285能够明显抑制细胞增殖和克隆形成,诱导细胞停滞于G0/G1期,抑制侵袭和转移。另外,经过dsP53-285干预后细胞周期相关基因如CyclinD1及CDK4/6表达下调,EMT相关基因如E-cadherin和β-catenin表达上调ZEB1及Vimentin出现表达下调。在裸鼠体内dsP53-285也能明显抑制膀胱移植瘤的生长及转移。更令人兴奋的是dsP53-285介导的抗肿瘤作用主要是通过调控野生型P53表达来实现的。结论:实验发现dsP53-285能够通过RNA激活作用上调人膀胱癌细胞中野生型P53基因的表达,并且能够在体内外抑制肿瘤细胞的增殖和转移。更多还原