左归丸调控miR34a对BMSCs成骨分化能力的影响

【作者】 余翔； 任辉； 沈耿杨； 张志达； 黄锦菁； 招文华； 唐晶晶； 黄学成； 姚珍松； 张昊； 梁德； 江晓兵；

【机构】 广州中医药大学第一附属医院； 广州中医药大学第一临床医学院； 广东省深圳市龙华新区人民医院脊柱外科；

【摘要】 目的探究左归丸调控miR34a对BMSCs成骨分化能力的影响。方法培养BMSCs,分别用大鼠高、低剂量左归丸含药血清和对照血清干预BMSCs成骨分化过程。采用CCK8检测左归丸对BMSCs的增殖、毒性作用,AKP活性检测BMSCs成骨分化活性,ALP染色检测细胞成骨分化能力,反转录-实时荧光定量技术(RT-q PCR)检测miR34a、Tgif2、Runx2、PPARγ2 mRNA表达;Western-blotting检测Tgif2、RUNX2蛋白表达。结果 CCK8检测发现:随着时间的增加,从第1天到第7天,BMSCs增殖呈上升趋势,各组间增加程度无统计学差异;7~14天,BMSCs增殖呈下降趋势。AKP活性检测示,干预BMSCs 3天后,左高组AKP活性显著高于其余两组(P<0.05);7天时,左低、左高组AKP活性均显著高于对照组(P<0.001)。干预3天时,ALP染色结果示,左高组ALP染色阳性率高于其余两组;干预7天时,左高、左低组ALP染色阳性率显著高于对照组。干预3天时,左高、左低组miR34amRNA表达较对照组上调,Tgif2、PPARγ2 mRNA表达较对照组下调;干预7天后,左高组miR34a mRNA表达较对照组显著上调(P<0.05);左低、左高组Tgif2 mRNA表达均较对照组显著下调(P<0.05);左高组PPARγ2 mRNA表达较对照组显著下调(P<0.01);干预3天后,左高组Tgif2蛋白水平较对照组显著降低(P<0.01);而左低组Runx2蛋白水平较对照组显著升高(P<0.01);干预7天后,左低、左高组Tgif2蛋白水平较对照组显著降低(P<0.001),而左低、左高组Runx2蛋白水平较对照组显著升高(P<0.05)。结论左归丸促进BMSCs增殖及成骨分化能力的作用,其机制可能是通过上调miR34a,抑制其靶基因Tgif2表达,同时下调成脂相关因子PPRAγ2和上调成骨核转录因子Runx2。更多还原