RNA干扰CXCR4和CXCR7对人子宫内膜癌裸鼠转移瘤生长的抑制作用

【作者】 叶园英； 黄煜； 颜莉莉； 赵淑萍； 张磊；

【机构】 青岛大学； 青岛市妇女儿童医院；

【摘要】 目的探讨应用小干扰RNA(siRNA)下调CXCR4和CXCR7表达对人子宫内膜癌移植瘤生长的影响及其可能机制。方法设计并合成针对CXCR4和CXCR7基因的化学修饰siRNA和阴性对照siRNA序列:CXCR4-siRNA、CXCR7-siRNA和Negative-siRNA。将人子宫内膜癌Ishikawa细胞悬液接种于30只裸鼠成功建立人子宫内膜癌裸鼠移植瘤模型,各组裸鼠分别给予移植瘤体内注射CXCR4-siRNA、CXCR7-siRNA、CXCR4-siRNA+CXCR7-siRNA、Negative-siRNA和生理盐水。每3d用游标卡尺测量肿瘤的长径和短径计算体积,并绘制各组移植瘤体积变化曲线。治疗结束后,处死所有荷瘤裸鼠,剥出肿瘤组织,并记录各肿瘤的质量和体积。以荧光定量RT-PCR和Western blotting验证各siRNA对CXCR4和CXCR7的基因沉默效果,采用免疫组化技术和TUNEL法检测各分组瘤组织中癌细胞增殖能力和凋亡水平的差异。结果各组肿瘤体积变化曲线表明:CXCR4 siRNA和CXCR-siRNA对移植瘤体进行单独注射和联合注射均可明显抑制移植瘤的生长。整个实验过程中,阴性对照组和生理盐水组的移植瘤生长迅速,而3个治疗组中的肿瘤自第3个治疗周期开始,生长速度明显减缓。治疗结束后称得各组移植瘤的质量分别为:CXCR4-siRNA注射组[(0.42±0.12)g]、CXCR7-siRNA注射组[(0.43±0.13)g]、CXCR4-siRNA和CXCR7-siRNA联合注射组[(0.40±0.08)g]、Negative-siRNA注射组[(0.90±0.09)g]和生理盐水对照组[(0.99±0.11)g]。瘤体内直接注射CXCR4-siRNA和CXCR7-siRNA可导致移植瘤组织中CXCR4和CXCR7mRNA和蛋白的表达显著降低;并使得子宫内膜癌细胞增殖能力显著下降(P<0.01),但3个治疗组的增殖抑制效果相当(P>0.05);TUNEL检测结果显示各分组瘤组织中肿瘤细胞凋亡率没有显著性差异(P>0.05)。讨论我们前期体外实验已经证实,利用siRNA沉默CXCR4和CXCR7基因后能够明显抑制子宫内膜癌细胞的增殖和侵袭能力。在本实验中我们采用移植瘤体内单独或联合注射CXCR4-siRNA和CXCR7-siRNA下调移植瘤组织中CXCR4和CXCR7的表达后,观察到各治疗组子宫内膜癌裸鼠移植瘤生长受到明显抑制,但各治疗组(CXCR4-siRNA单独治疗、CXCR7-siRNA单独治疗和二者联合治疗)的肿瘤抑制效果相似,联合治疗并不能产生叠加效应。同样,通过检测各组移植瘤组织中PCNA(增殖细胞核抗原)的表达,我们发现3个治疗组中肿瘤细胞PCNA表达阳性率较阴性对照组或生理盐水对照组相比明显降低,但CXCR4-siRNA治疗组和CXCR7-siRNA治疗组对子宫内膜癌细胞增殖能力的抑制作用相当,甚至二者联合注射也不能产生更大的抑制效应。这些结果表明:CXCR4和CXCR7在子宫内膜癌发生发展过程中起着极其重要的作用,有望成为子宫内膜癌基因治疗的新靶点。更多还原