DHEA对于高龄小鼠卵子凋亡及黏连蛋白水平的影响

【作者】 褚楠； 邱学敏； 李大金； 张斌； 王凌；

【机构】 复旦大学附属妇产科医院； 复旦大学附属妇产科研究所；

【摘要】 在卵巢老化过程中,卵子的数量和质量都明显下降;这一过程中会出现卵泡数量减少和卵子非整倍体率增加。粘连蛋白的耗竭是高龄非整倍体增加的主要原因之一。DHEA可以提高卵巢储备功能,减少非整倍体率,但DHEA对于卵巢功能的作用尤其是卵子黏连蛋白水平的作用仍为未知。本研究旨在研究DHEA对于小鼠卵巢功能的影响,主要集中在DHEA对于小鼠卵子黏连蛋白水平和卵泡数量的作用。通过取3周、6周、12周、6月、10月C57BL/6小鼠卵巢,称量其重量,卵巢组织切片,系统性的研究卵泡数量、卵子凋亡情况及黏连蛋白水平变化规律。对9月龄的C57BL/6小鼠分组灌胃:生理盐水组(n=3),17β-雌二醇组(1 00μg/Kg*d,n=3),DHEA组(5mg/Kg*d n=3)。灌胃4周后,处死小鼠,称量其卵巢重量。准备卵巢组织切片,免疫组化抗VASA染色确定卵泡总数量;HE染色确定各阶段卵泡数量。抗γH2AX染色确定卵子DNA双链断裂(DSB)程度,TUNEL染色确定卵泡凋亡情况,免疫荧光测定卵子中黏连蛋白亚基REC8,SMC1β和SMC3的水平;对各组数据进行分析。始基卵泡、初级卵泡、次级卵泡数量随着小鼠年量的增长而下降。对高龄小鼠补充17β-雌二醇和DHEA,只能增加初级卵泡数量,对其他各时期的卵泡数目无明显影响。进一步的组化实验表明,随着年龄的增长,小鼠卵泡的凋亡不断增加,这一结果可能是由于卵子DNA双链断裂程度增加所导致;对高龄小鼠补充17β-雌二醇和DHEA,可以减少其卵泡凋亡程度及DNA双链断裂程度。随着小鼠年龄的增大,卵子黏连蛋白亚基REC8和SMC1β水平不断降低,对高龄小鼠补充DHEA和17β-雌二醇可以延缓这一减少;卵子黏连蛋白亚基SMC3水平在各月龄小鼠中无明显变化,对高龄小鼠补充DHEA和17β-雌二醇对其水平也无明显影响。对高龄小鼠补充DHEA可以增加其卵泡数量,抑制其凋亡,延缓黏连蛋白的减少。更多还原