日本乙型脑炎强弱毒株非结构蛋白NS1、NS2A和NS1-NS2A真核表达差异的研究

【作者】 韦冠东； 汤德元； 曾智勇； 黄涛； 王彬； 龙冬梅； 胡玲玲；

【机构】 贵州大学动物科学学院； 贵州大学明德学院；

【摘要】 本研究拟通过将日本乙型脑炎减毒活疫苗(SA14-14-2株)和日本乙型脑炎病毒贵州分离株(GZ株)接种于BHK-21细胞培养,观察培养24 h、36h、48 h和72 h后的细胞病变差异,75%细胞出现病变效应(CPE)后收集细胞悬液提取总RNA,分别设计6对特异性引物,应用RT-PCR技术扩增非结构蛋白NS1、NS2A和NS1-NS2A基因,克隆到pMD19-T Simple载体后测序,进一步构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-NS1r、pcDNA3.1(+)-NS2Ar、pcDNA3.1(+)-NS1-2Ar、pcDNA3.1(+)-NS1q、pcDNA3.1(+)-NS2Aq和pcDNA3.1(+)-NS1-2Aq,将真核表达质粒单独免疫健康小鼠,通过JEV抗体检测和流式细胞仪检测小鼠外周血CD4~+、CD8~+T淋巴细胞含量检测,比较强弱毒株非结构蛋白的免疫效果,分析强弱毒株非结构蛋白NS1,NS2A和NS1-2A真核表达的差异,寻找乙型脑炎的非结构蛋白与其致病机理的关系,以期为乙脑疫苗的研制和乙脑的预防奠定基础。更多还原