开发基于田间可应用的环介导等温扩增方法快速检测小麦白粉病菌

【作者】 薛敏峰； 龚双军； 杨立军； 史文琦； 曾凡松； 向礼波； 喻大昭；

【机构】 农业部华中作物有害生物综合治理重点实验室/农作物重大病虫草害防控湖北省重点实验室/湖北省农业科学院植保土肥研究所；

【摘要】 由专性寄生真菌Blumeria graminis f.sp.Tritici(Bgt)引起的小麦白粉病是小麦生产上的主要病害之一。准确监测该病害的发生为精准施药提供重要依据。目前多采用的田间调查病害发生或室内分子鉴定,前者方法费时费工,效率很低;后者需要昂贵的仪器设备,不适合田间原位检测。本研究中我们开发了一种环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法田间快速检测小麦白粉菌,设计8对引物扩增Bgt特异性序列,其中2对引物高效特异性区分来其它7种植物宿主的白粉菌菌株。用该方法检测少于需要300fg的基因组DNA,显示比普通PCR方法高100倍的灵敏度。本研究建立的LAMP反应在65℃60min内即可迅速完成,加入钙黄绿素后焦磷酸镁沉淀的颜色变化可用肉眼观察到。田间应用结果显示,检测早春季节不同地理来源的小麦叶片中检测到的白粉菌与常规人工培养发病的结果相一致。由于其技术简单,时间效率高且不需要昂贵的设备,因此这种基于LAMP的诊断方法有望在田间条件下使用,使病害预测更加准确和高效。更多还原