苹果病毒RT-PCR检测体系优化及保存方法的研究

【作者】 蒋东帅； 郗娜娜； 张静娜； 马杰； 王祎丹； 杨军玉； 崔利文； 胡同乐； 王树桐； 王亚南； 曹克强；

【机构】 河北农业大学植物保护学院；

【摘要】 优化苹果主要病毒RT-PCR检测样本采集及保存方案,提高病毒检测的可靠性,为实现果园无毒化栽培奠定基础。以携带苹果锈果类病毒(Apple skin scar viroid,ASSVd)、苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leafspot virus,ACLSV)、苹果花叶病毒(Apple mosaic virus,ApMV)、苹果茎痘病毒(Apple stem pitting virus,ASPV)、苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)的苹果植株为试材,比较了两套RT-PCR检测体系的灵敏度;选择灵敏度较高的RT-PCR检测体系,在不同月份采集苹果树不同组织部位,进行RT-PCR检测效果的比较;然后,比较样本两种不同保存形式的检测效果,以及在不同温度下保存不同时间的检测效果。一年中以10月苹果植株各组织部位ASSVd、ACLSV、ApMV、ASPV4种病毒的检出率较高,各月均以冠层下部一年生枝皮和根皮组织检出率相对较高,而对于ASGV,一年中以4月苹果植株各组织部位的检出率较高,各月份以冠层上部一年生枝皮和根皮组织检出率相对较高;用报纸包裹枝条方式保存的样本检测效果优于锡箔纸包裹枝皮粉末的样本。4℃、25℃保存的样本4种病毒的检出率高于其他温度保存相同时间的样本。ASSVd、ACLSV、ApMV、ASPV RT-PCR检测的适宜时期为10月,冠层下部一年生枝皮为适宜检测部位,ASGV的适宜检测时期为4月,适宜检测组织部位为冠层上部一年生枝皮。在方便采集的时期,根系也可作为各病毒RT-PCR检测的组织部位。样本采集后,以枝条保存的检测效果优于枝皮粉末,样本保存适宜温度为4℃、25℃,3天内可保证5种病毒的检测可靠性,5天内保证除ApMV其他4种病毒的检测可靠性。更多还原