一种钩藤叶部新病害叶斑病的病原鉴定

【作者】 陈小均； 黄露； 吴石平； 何海永； 杨仟； 莫章刑； 杨再刚； 龙明成；

【机构】 贵州省植物保护研究所； 剑河县钩藤研究所； 剑河县科技局；

【摘要】 中药材钩藤在贵州剑河县大面积植,一种真菌引起的叶斑病发生普遍,对钩藤产业或将造成潜在影响,但目前对钩藤病害的研究还比较少,还未见有钩藤病害的相关报道。拟盘多毛孢属很多种都可引起多种植物产生病害,如芒其、紫荆等植物。笔者从发病的钩藤叶片上分离一株真菌性病原,为了进一步对病原进行准确鉴定,笔者结合形态学和分子生物学方法以及柯赫氏法则进行研究。经鉴定,钩藤叶斑病由拟盘多毛孢属引起,该结果为国内外未见报道,为增加钩藤病害目录和病害防控提供依据。症状描述:该病害主要为害叶片,形成圆形或近圆形病斑,红褐色,病斑上着生小黑点。以培养物进行接种后,叶片初期呈水渍状,以接种点为圆心向四周扩展,受叶脉影响,病斑形状不规则,圆形或近圆形。后期变为红褐色,其上散生近球状的黑色颗粒(分生孢子盘),病健交界明显。回接发病症状与野外采集的病叶症状一致。病原菌分离、培养和鉴定结果:对钩藤病叶标样进行表面消毒后,在解剖镜下挑取黑色分生孢子器,对获得的培养物进行柯赫氏法则验证,在发病部位再次分离获得纯培养物。在PDA上培养的菌落呈圆形,菌丝体白色,致密,其菌落生长边缘整齐,气生菌丝发达,菌丝纤细无隔,少数锐角分枝,培养2~3个星期后能形成类似菌核的黑色分生孢子堆,后期产生分生孢子盘,分布于整个菌落;分生孢子盘呈球形,直径为100~200μm,顶端有墨汁状黏液,镜检内含大量分子孢子。分生孢子梗的基部菌丝膨大呈球状,顶端有瓶状孢子梗;分生孢子成熟后直立或稍弯曲,长18.8~25.1μm,宽6.4~8.1μm,具5个细胞,具3根细长顶毛,其分生孢子呈纺锤形,有4个隔膜,基胞无色,平截,壁光滑。根据以上特征认为,该菌株无性阶段属于半知菌亚门黑盘孢目,拟盘多毛胞属(Pestalotiopsis sp.)。将扩增产物测序所得序列与GenBank中核酸数据进行Blast分析的结果表明,该序列与已报道的拟盘多毛胞属(Pestalotiopsis sp.),因目前数据库中已报道的该属其他种同源性不高,因此不能鉴定具体的种。或许该分离物是一个未报道的种。更多还原