低氧激活联合亚硝基脲NB GNU导致DNA股间交联的HPLC-ESI-MS/MS研究

【作者】 葛瑶； 余然； 李劲涛； 赵丽娇； 钟儒刚；

【机构】 北京工业大学生命科学与生物工程学院环境与病毒肿瘤学北京市重点实验室；

【摘要】 氯乙基亚硝脲（CENUs）是一类重要的抗癌烷化剂,能够通过导致d G-dC股间交联而发挥抗癌活性[1]。O⁶-烷基鸟嘌呤-DNA-烷基转移酶（AGT）介导的DNA修复作用是导致CENUs耐药性的主要原因[2]。O⁶-苄基鸟嘌呤（O⁶-BG）是有效的AGT抑制剂;然而,由于不具有肿瘤靶向性,O⁶-BG作为辅药与CENUs联合使用会导致CENUs毒副作用增强。为了解决以上问题,本课题组设计并合成了一种具有抗耐药性和肿瘤低氧靶向性的新型低氧激活联合亚硝基脲NBGNU（如图1A所示）。该化合物在肿瘤低氧区可分解产生AGT抑制剂,同时分解生成的氯乙基重氮盐离子可烷化鸟嘌呤并进一步产生d G-dC交联。本研究使用HPLC-ESI-MS/MS法对NBGNU导致人脑神经胶质瘤细胞SF763的d G-dC交联进行了定量分析,并与尼莫司汀（ACNU）处理组和ACNU+O⁶-BG联合处理组进行了比较,探讨了NBGNU的抗肿瘤活性和低氧选择性。图1B为使用选择反应扫描（SRM）监测d G-dC（m/z521→289）和内标¹⁵N-dG-dC（m/z524→292）的离子流图。将AGT高表达的SF763细胞分别在常氧和低氧条件下使用浓度为0.2 mM的NBGNU处理12小时,然后测定细胞中的d G-dC交联。如图1C所示,在低氧条件下,NBGNU导致的交联率为ACNU处理组dG-dC交联率的40.2倍（P<0.01）,为ACNU+O⁶-BG联合处理组交联率的9.8倍（P<0.01）;并且NBGNU在低氧条件下导致的交联率是常氧条件下的3.7倍（P<0.01）。结果表明,NBGNU具有理想的低氧选择性,尤其是在低氧条件下,其交联能力明显高于传统亚硝基脲类抗癌药物ACNU及其与O⁶-BG联合用药。本研究为新型靶向性联合亚硝基脲的开发奠定了基础。更多还原