牛病毒性腹泻病毒重组E0蛋白间接ELISA方法的建立及临床应用

【作者】 肖盛中； 周子恒； 马振国； 马旭升； 李岩； 张彦红； 杨霞； 盛金良； 陈创夫；

【机构】 新疆石河子大学动物科技学院；

【摘要】 牛病毒性腹泻黏膜病(Bovineviral diarrheamucosal disease,BVD-MD)是由牛病毒性腹泻病病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)引起的牛等多种动物感染的一种重要传染性疾病。呈世界性分布,具有极其严重的危害性,给畜牧业造成了极大的危害。目前,该病尚未有有效的防控措施,尽管有部分发达国家以根除了BVDV,但仍全世界范围内流行多发,给畜牧业发展造成巨大经济损失。因此,该病的有效检出并及时淘汰是净化畜群的重要手段。本项目通过构建BVDV病毒E0蛋白主要抗原表位区段基因重组表达载体p ET30a-E0,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,表达产物经HIS镍柱纯化。利用Western blot验证重组蛋白与BVDV阳性血清发生特异性反应。以重组纯化BVDV-E0蛋白作为包被抗原包被ELISA板,优化包被蛋白量、稀释血清浓度、样本稀释液、酶标二抗的稀释倍数等,确定间接ELISA最优条件,建立基于BVDV重组E0蛋白的血清抗体间接Elisa检测方法,该方法与IDEXX抗体间接试剂盒比较,总符合率可达92.19%。利用建立的间接Elisa方法分别对新疆北疆地区石河子、奎屯、沙湾等规模化奶牛场473份血清样本进行检测,结果表明石河子地区奶牛场阳性率为70.87%(168/237),奎屯地区奶牛场阳性率为46.10%(41/89),沙湾地区奶牛场阳性率为63.27%(93/147),石河子地区和沙湾地区BVDV抗体阳性率高于奎屯地区,可能与石河子距离沙湾较近,奶牛场动物流动机会较大所致。综合分析,新疆北疆地区规模化奶牛场BVDV抗体阳性率较高,需要加强该病综合防控措施。本实验建立BVDV间接ELISA方法可用于兽医临床检测,为BVDV的防控提供了技术支持。更多还原