雏鸡屎肠球菌病形态学与分子生物学诊断

【作者】 张欣； 李博； 闫金坤； 刘利强； 刘建钗； 刘娜； 刘彦威； 沈洁； 史瑞雅； 贾苗苗；

【机构】 河北工程大学生命科学与食品工程学院； 河北省禽病工程研究中心；

【摘要】 为了调查雏鸡屎肠球菌感染,从发病的雏鸡肝脏分离病菌,并将采集的肝脏、心脏等病料进行固定、制作病理切片;从病鸡肝脏分离接种的营养琼脂平板上挑取单个菌落进行纯化培养并对纯化后的病菌进行革兰氏染色;采用水煮法对纯化后的分离菌进行DNA提取、16S r DNA PCR扩增及序列分析并对分离菌进行特异PCR分析以及致病性试验。结果显示分离株菌落细小圆形,菌体为圆形或椭圆形,革兰氏染色阳性;分离株与Gen Bank中屎肠球菌相似性为99.6-98.7%,与其他菌株的相似性均小于97%;经特异PCR分析,扩增条带为特异屎肠球菌的目的片段;病理观察发现,肝脏肿大、出血,肝细胞质疏松并且致病试验复制出与临床相似病。经分子生物学方法结合菌落及菌体的形态学,该菌被鉴定为屎肠球菌;病理学观察及致病性试验均提示该病雏为屎肠球菌感染。但进一步的生化试验发现与报道的屎肠球菌标准株的不完全一致,且3株分离菌的生化试验结果也有差异。为此,本试验采用屎肠球菌特异PCR的方法,进一步验证分离株为屎肠球菌。在不同生化鉴定方法,肠球菌对糖发酵的结果不完全一致。这与本试验分离3株菌对发酵试验结果类似。分析其原因可能屎肠球菌菌株不同,对糖发酵能力有差异。因此下一步研究可对分离株进行药敏试验,分析菌株不同抗药性是否有差异。更多还原