肿瘤蛋白SND1阻挠肿瘤细胞中MHC-I类分子抗原呈递导致肿瘤免疫逃逸的分子机制

【作者】 王媛； 王鑫廷； 李宏帅； 姚智； 杨洁；

【机构】 免疫微环境与疾病省部共建教育部重点实验室； 教育部创新团队； 天津医科大学卓越人才计划；

【摘要】 目的:肿瘤细胞主要组织相容性复合体(MHC)I类分子的改变会导致免疫应答产生障碍,使肿瘤细胞不能被CD8+T细胞识别,发生免疫逃逸。本实验室及其它实验室相继发表了多篇关于SND1参与各种肿瘤的发生发展以及转移的文章,但重点都放在了SND1在肿瘤细胞本身所固有的粘附和迁移能力上,关于SND1在肿瘤免疫微环境中的工作还未曾见诸报端,本研究拟探讨SND1通过调控肿瘤细胞中MHC-I类分子的表达而影响肿瘤免疫逃逸的分子机制。方法:选取小鼠的结肠癌细胞MC38及黑色素瘤细胞B16F10,通过Crispr/cas9技术构建稳定敲除SND1的肿瘤细胞株,并将构建好的细胞进行小鼠皮下成瘤实验;小鼠成瘤后统计分析瘤体间的差异,流式细胞术检测小鼠瘤体中免疫细胞的浸润情况;qP CR技术及ELISA技术检测瘤体匀浆中趋化因子及细胞因子;瘤体组织石蜡切片的HE染色及免疫组化检测瘤体中浸润的免疫细胞。Western Blot及流式细胞术检测SND1在不同肿瘤细胞中与MHC-I类分子的相关性及其相关机制探讨;Co-IP、GST-pulldown、免疫荧光共定位及Duolink实验检测SND1与MHC-I类分子合成加工或降解的蛋白在同一复合物中。结果:(1)小鼠皮下成瘤模型中,SND1-KO组的瘤体比WT组明显减小,流式结果显示SND1-KO组的瘤体浸润的免疫细胞明显增多,尤其是CD8+T细胞;(2)在小鼠肿瘤细胞MC38、B16F10及人源肿瘤细胞He La、SKOV3中,敲除SND1后,肿瘤细胞表面MHC-I类分子表达升高;(3)Co-IP、GST-pulldown、免疫荧光共定位及Duolink实验结果显示SND1与人MHC-I类分子HLA-A及其合成所需的重要蛋白Calnexin处于同一复合物中。(4)在肿瘤细胞中过表达SND1后,HLA-A结合的Calnexin减少,其结构不稳定,降解增多,证明SND1促进了MHC-I类分子HLA-A的降解。结论:肿瘤蛋白SND1通过促进MHC-I类分子的降解使肿瘤细胞表面的MHC-I类分子减少,抗原提呈过程受到抑制,肿瘤细胞不能被CD8+T细胞识别杀伤,从而促进肿瘤细胞发生免疫逃逸。更多还原