外源性TMEM98与动脉粥样硬化的相关性及分子机制的研究

【作者】 矫燕； 朱红梅； 崔颖； 赵莹； 高颖；

【机构】 大连医科大学生化教研室； 辽宁省医学细胞分子生物学重点实验室；

【摘要】 背景:动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是一种以血脂代谢异常为病理基础多因素诱发的血管壁慢性病,是心脑血管疾病的主要诱因,每年因动脉粥样硬化相关疾病死亡的人数占全球总死亡人数的一半以上。探索动脉粥样硬化的发病机制对预防和治疗心脑血管疾病意义重大。动脉粥样硬化斑块形成是由内皮细胞和平滑肌细胞以及免疫系统的浸润细胞协调作用的过程。炎症在动脉粥样硬化过程的各个阶段都起着重要的作用,从早期的白细胞聚集到内皮下纸质沉积,再到晚期的斑块破裂,进而导致血栓形成。在动脉粥样硬化这一慢性炎症性疾病发展过程中,某些蛋白质起着关键性作用。有研究报道发现TMEM98与非小细胞型肺癌、肝癌、免疫反应等密切相关,但TMEM98与心血管疾病的关系方面目前研究的很少。本研究探讨了外源性TMEM98对血管平滑肌的增殖和迁移作用及与动脉粥样硬化相关的分子机制。目的:本研究旨在进一步探讨外源性TMEM98在PDGF介导的血管平滑肌细胞增殖和迁移中的作用及分子机制,为深入研究动脉粥样硬化发病机制提供理论和实验基础。结果:1.根据血清LDL-C水平筛选出高脂血症的病人46例,健康人20例,用ELISA的方法检测,发现与健康人相比,高脂血症病人血清中的TMEM98含量明显升高。构建AS小鼠模型,与对照组相比,免疫组化和免疫荧光结果显示TMEM98在AS斑块中表达明显升高。2.采用PDGF-BB分别诱导大鼠平滑肌细胞(A7r5)、人主动脉血管平滑肌细胞(AOSMC),利用ELISA方法检测细胞培养液,发现TMEM98含量显著升高,且具有时间依赖性。qPCR检测上述两种细胞系中TMEM98的表达水平,结果显示均明显升高。免疫荧光结果显示PDGF-BB刺激细胞12h,A7r5和AOSMC中TMEM98的表达水平较对照组明显升高。3.当外源性TMEM98加入细胞培养液,利用CCK-8和MTT检测AOSMC的增殖,发现外源性TMEM98可以促进AOSMC的增殖;利用Boyden Chamber检测AOSMC的迁移能力,发现外源性TMEM98可以促进AOSMC的迁移,且具有时间和浓度依赖性;免疫荧光结果显示外源性TMEM98可以促进细胞伪足的形成。4.利用AOSMC探寻外源性TMEM98对细胞增殖和迁移的分子机制。Western Blot结果显示:p-AKT(T308)、p-AKT(S473)、p-GSK-3β和p-ERK表达水平升高,发现外源性TMEM98可通过AKT通路和ERK通路促进血管平滑肌细胞增殖和迁移。结论:1.PDGF-BB可介导TMEM98的分泌,证明TMEM98是一种分泌蛋白;2.外源性TMEM98可通过AKT通路及ERK通路促进血管平滑肌细胞增殖和迁移。更多还原