大片吸虫钙结合蛋白-2(CaBp2)基因的克隆、表达及免疫反应性研究

【作者】 袁晓丹； 侯俊玲； 田艾灵； 黄思扬； 王春仁； 朱兴全；

【机构】 黑龙江八一农垦大学动物科技学院； 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室； 扬州大学兽医学院/江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心；

【摘要】 目的克隆、表达大片吸虫钙结合蛋白-2(Ca Bp2),并探索其作为诊断抗原的可行性。方法鉴定大片吸虫后,以肝片吸虫Ca Bp2的基因序列为模板,设计以Nde 1和Xho 1作为酶切位点的Ca Bp2蛋白的引物。提取大片吸虫总RNA,利用RT-PCR克隆出目的基因,对其进行测序鉴定、生物信息学分析、系统进化分析。构建p ET-30a-Fg Ca Bp2重组表达载体后,在大肠杆菌Transetta(DE3)感受态细胞中完成诱导、表达;对纯化的目的蛋白进行SDS-PAGE和Western-blot分析;目的蛋白免疫家兔后,制备多克隆抗体。结果大片吸虫Ca Bp2开放阅读框为570 bp,编码189个氨基酸残基。生物信息学预测表明,CaBp2主要以α螺旋为主,β折叠较少;具有较多B细胞抗原表位。Ca Bp2呈现出可溶性表达。Western blotting检测结果表明所表达的蛋白在25 kD处存在特异性条带,其具有良好的免疫反应性。结论成功克隆大片吸虫Ca Bp2基因,其表达产物能与该蛋白的特异性多克隆抗体产生良好的免疫反应性,是潜在的大片吸虫病诊断抗原。更多还原