脑胶质瘤U87-EGFRvⅢ细胞反义寡核苷酸的¹⁸⁸Re标记实验研究

【作者】 李贵平； 郑文莉； 黄宝丹； 杜丽； 黄凯； 张辉；

【机构】 南方医科大学南方医院核医学科；

【摘要】 目的:表皮生长因子受体Ⅲ型突变体（epidermal growth factor receptor variantⅢ,EGFRvⅢ）是胶质瘤中最常见的突变体,在正常组织细胞中不表达,仅在于肿瘤细胞中表达,与肿瘤的侵袭性和致瘤性密切相关。通过Cell-SELEX技术,从针对稳定过表达表皮生长因子受体Ⅲ型突变体的U87-EGFRvⅢ细胞中筛选出与靶受体结合具有高特异性和高结合力的寡核苷酸适配子U₂。本研究对获得的脑胶质瘤细胞反义寡核苷酸U₂进行放射性核素铼(¹⁸⁸Re)的标记,探讨采用直接标记法的可行性,评价¹⁸⁸Re-U₂的放化特性,观察¹⁸⁸Re-U₂在正常动物体内动力学特性及显像特点,为其进一步研究与应用提供实验依据。方法:采用直接标记法进行U₂的¹⁸⁸Re标记,分别对U₂反应量（40μg、20μg、10μg）、氯化亚锡用量（3 mg、1.5 mg、0.75 mg）、标记体系pH（2、3、4）逐一进行试验,采用正交设计进行分析,以寻找最佳标记条件。采用纸层析法测定标记率,展开剂分别为丙酮（展开剂A）、生理盐水（展开剂B）和氨水/乙醇/水混合物（展开剂C）;然后标记产物进行Sep-PaK C18反相柱分离纯化。通过体外稳定性实验评价¹⁸⁸Re-U₂的放化特性,测定标记物静脉注射后在新西兰大耳兔不同时相血液放射性清除曲线,应用SPECT显像观察标记物在大白兔体内组织器官的放射性动态分布情况。结果:采用正交试验设计法,确定最佳标记条件为:取高纯度10μg U₂溶于pH=7.5的10μL磷酸缓冲液（PBS）中,震荡混匀后,再加入新配制的50μ11.5 mg/ml氯化亚锡（SnCl₂）溶液,随即加入300μl¹⁸⁸Re（约18.5²5MBq）淋洗液,最后再加入10 mg/ml抗坏血酸100μL溶液,调整反应体系pH为2左右,震荡混匀后置于37℃水浴1.5 h。在最佳标记条件下的标记率平均约为70%±14%,最高时可达84.5%。经Sep-PaK C18反相柱分离纯化后放化纯大于90%。体外稳定性测定结果表明室温下和血清中37℃下放置24 h放化纯度分别为70.6%和95.6%。¹⁸⁸Re-U₂在兔体内的血放射性清除曲线测定结果显示¹⁸⁸Re-U₂在血液中清除迅速,30 min时放射性约为5 min时的一半。¹⁸⁸Re-U₂在兔体内的SPECT动态显像表明放射性主要通过肾脏排泄,其余脏器内放射性均较低。结论:¹⁸⁸Re直接标记U87-EGFRvⅢ细胞反义寡脱氧核苷酸链U₂的方法简单,具有良好的标记率和体外稳定性,并且体内分布动力学特性也比较理想。更多还原