赖氨酸对原代奶牛乳腺上皮细胞中酪蛋白及mTOR信号通路相关基因表达的影响

【作者】 高海娜； 郑楠； 胡菡； 李发弟； 王加启；

【机构】 甘肃农业大学动物科学技术学院； 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业部奶产品质量安全风险评估实验室(北京)； 农业部奶及奶制品质量监督检验测试中心(北京)； 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室；

【摘要】 本试验旨在探究单一添加不同浓度的赖氨酸对原代奶牛乳腺上皮细胞的增殖,以及mTOR信号通路介导的酪蛋白合成相关基因的影响。在试验期,细胞处理时用厄尔平衡溶液(EBSS)代替正常培养基,在此基础上依次添加不同浓度的赖氨酸,采用MTT法检测培养12h和24h的细胞增殖和利用q RT-PCR技术检测4个编码酪蛋白基因和8个mTOR信号通路中与乳蛋白合成翻译相关的基因的相对表达量。结果表明:添加赖氨酸12 h,浓度范围为0.5~24 mmol/L时,原代奶牛乳腺上皮细胞增殖数量增加(P=0.05);添加赖氨酸24 h,浓度范围为0.5~8mmol/L时,细胞增殖数量增加(P<0.01)。当赖氨酸的添加浓度在0.5~8mmol/L时CSN1S1,CSN1S2,CSN2,CSN3基因表达均显著上调(P<0.01)。当赖氨酸添加0.5~16mmol/L时mTORC1复合物1中的mTOR和Gβl(P<0.05)基因表达显著上调,而raptor基因表达在赖氨酸添加量为0.5~2mmol/L时显著上调(P<0.05)。在酪氨酸添加的不同浓度范围内,信号通路下游因子S6K1、4EBP1和e EF2基因表达均显著上调(P<0.05);rps6基因表达上调,e IF4E基因表达下调,但差异均不显著。以上结果表明,补充赖氨酸能显著促进乳腺上皮细胞中酪蛋白的合成,这一过程与mTOR信号通路介导蛋白质合成相关。更多还原