衰老标记蛋白30对H₂O₂所致人皮肤成纤维细胞衰老表型的影响

【作者】 田黎明； 彭圆； 许斌； 胡荣毅； 姜红浩； 姜倩；

【机构】 武汉市第一医院皮肤科； 湖北中医药大学基础医学院；

【摘要】 目的:观察高表达的衰老标记蛋白30（SMP30）对H₂O₂所致的正常人皮肤成纤维细胞（NHSF）衰老表型的影响。方法:NHSF细胞分别转染human SMP30 cDNA或空载体pcDNA3.1（分别命名为NHSF+SMP30、NHSF+空载体）,然后150μmol/L H₂O₂处理2 h。用RT PCR和Western印迹来分析SMP30的表达,显微镜观察细胞形态,试剂盒检测衰老相关的β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）、细胞活性氧（ROS）以及超氧化物歧化酶（SOD）的活性。实验分为转染H₂O₂处理组（NHSF+SMP30+H₂O₂）、转空载体H₂O₂处理组（NHSF+SMP30+H₂O₂）以及转空载体组（NHSF+空载体）。结果human SMP30 cDNA明显上调了NHSF中SMP30的表达。NHSF+空载体+H₂O₂组SMP30 mRNA和蛋白水平（与GAPDH mRNA和蛋白的比值分别为0.157±0.003和0.277±0.013）明显低于NHSF+空载体组（分别为0.343±0.004和0.637±0.013）,两组比较,均P<0.05;NHSF+SMP30+H₂O₂组SMP30表达水平（0.286±0.020和0.557±0.015）高于NHSF+空载体+H₂O₂组（P<0.05）。SA-β-gal染色率在NHSF+空载体、NHSF+空载体+H₂O₂、NHSF+SMP30+H₂O₂分别是（2.925±0.195）%、（76.994±3.002）%、（31.945±4.371）%,各组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。ROS活性在NHSF+空载体、NHSF+空载体+H₂O₂、NHSF+SMP30+H₂O₂分别是（104.736±6.992）%、（263.187±6.118）%、（193.088±6.960）%;SOD水平在NHSF+空载体、NHSF+空载体+H₂O₂、NHSF+SMP30+H₂O₂分别是（90.809±2.361）U/mg、（30.809±3.082）U/mg、（61.604±1.3813）U/mg,各组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。结论高表达的SMP30能够抑制细胞衰老相关β-半乳糖甘酶（SA-β-gal）和细胞活性氧（ROS）的表达,同时上调了SOD的活性。更多还原