兔髓核细胞自然传代培养退变模型的构建

【作者】 陈琪； 杨曦； 刘立岷； 宋跃明；

【机构】 四川大学华西医院； 浙江省人民医院；

【摘要】 目的构建兔髓核细胞自然传代培养退变模型,为椎间盘退变研究提供细胞模型。方法:从6-8周龄新西兰大白兔脊柱胸腰椎节段中获取髓核组织,经酶消化法获取原代髓核细胞,计为P0代,于37℃、5%CO2孵育箱培养,待培养孔底面细胞增殖融合超过90%时,胰酶消化法传代,依次计为P1、P2、P3代,共4代髓核细胞,每代髓核细胞计数后均按1×105/孔种入6孔板。相差显微镜观察4代髓核细胞的细胞形态,记录贴壁、生长倍增、传代时间;双染流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫细胞荧光和Westernblot检测P0-P3代髓核细胞HIF-1α、MMP-2、Aggrecan、ColⅡ蛋白表达水平。结果:髓核细胞形态从P0代的三角形、多角形逐渐向P3代纤维软骨样梭形转变,细胞体积变大,含特征性空泡细胞逐渐减少,细胞贴壁、生长倍增及传代时间逐渐延长;P0-P3代髓核细胞凋亡率依次为5.47±0.91%,13.77±2.42%,33.46±1.82%,38.76±1.50%,细胞凋亡率逐渐增加,组间两两比较具有统计学差异;免疫细胞荧光和Western blot检测,P0-P3代合成代谢相关蛋白HIF-1α、Aggrecan、ColⅡ逐渐降低,分解代谢相关蛋白MMP-2逐渐升高。结论:成功构建兔髓核细胞自然传代培养退变模型,髓核细胞退变时细胞形态向纤维软骨样细胞转变,凋亡率增加,细胞合成代谢减慢,分解代谢加快。更多还原