平板流动腔评价携重组体GPIba靶向脂质微泡与被激活的假性血友病因子(VWF)之间的粘附效能

【作者】 张雨薇； 申屠伟慧； 蒲朝霞； 周丽明； 黄朝旭；

【机构】 浙江大学医学院附属第二医院；

【摘要】 目的检测不同剂量的生物素标记GpIbα抗体与脂质微泡的结合效率,模拟生理血流条件,评价携重组体GPIba靶向脂质微泡与被激活的假性血友病因子(VWF)之间的粘附效能。方法应用声振法制备脂质微泡(裸微泡组),生物素-亲和素桥接法制备生物素化携重组体GPIba靶向脂质微泡(靶向组)和携非特异性IgG的脂质微泡(对照组),库尔特计数仪检测微泡的粒径分布;分别将30μl、60μl、120μ1GpIbα及IgG与微泡200μl混合,应用流式细胞仪检测不同剂量的生物素标记的GpIbα、IgG与脂质微泡的特异性结合率;以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作为细胞模型,研究10ml 1μg/ml细菌脂多糖(LPS)刺激内皮细胞5h后VWF的表达情况;在平行板血流灌注腔模拟的不同流场环境下(应切速率为300 S-和500 S-),观察三种不同微泡对炎性HUVEC内皮细胞的黏附作用,应用免疫组织化学分析以确定vWF的表达量差异。结果 30μlGpIbα与200μl微泡混合组,抗体微泡结合率为7.2%,60μ1GpIbα与200μl微泡混合组,抗体微泡结合率为30.7%,120μlGpIbα与200μl微泡混合组,抗体微泡结合率为37.9%;在LPS刺激下,内皮细胞vWF表达显著上调;平行板流动腔实验中靶向组炎性内皮细胞平均结合微泡数最多,剪切应力300S-为17个,剪切应力500 S-为4个,免疫组织化学分析显示LPS刺激HUVEC后vWF表达量在三组不同微泡中无明显差异。结论不同浓度生物素标记的GpIbα均能与脂质微泡特异性结合,结合率呈剂量依赖性;在LPS刺激下,内皮细胞vWF表达显著上调;在平板流动腔中,携重组体GPIba靶向微泡可特异性地与被激活的vWF结合,有助于判定下一步动物实验中超声分子成像的效果和靶向微泡的在体应用环境。更多还原