动物源葡萄球菌携带cfr和spd小质粒

【作者】 李德喜； 单新新； 张素梅； 李新生； 姚红； 商艳红； 杜向党；

【机构】 河南农业大学牧医工程学院；

【摘要】 【目的】cfr基因编码23Sr RNA甲基化酶,对包括酰胺醇类、截短侧耳素类和利奈唑胺等5类药物耐药。此外,spd是对大观霉素耐药的耐药新基因。这些基因均定位于葡萄球菌质粒上,易于扩散传播。因此,本研究了解临床分离葡萄球菌中携带cfr和spd质粒的流行情况及其分子特征。【方法】cfr和spd阳性菌株的药敏试验采用微量肉汤稀释法。耐药基因的检测采用PCR方法。根据质粒提取试剂盒方法,进行上述野生质粒的提取。基因的转移,采用电转化试验,将上述提取质粒电转到受体菌RN4220。质粒定位采用S1-PFGE和southern blot方法操作。全质粒序列的获得采用inverse PCR、Sanger测序方法以及生物信息学分析。【结果】鸡源、猪源松鼠葡萄球菌携带质粒命名为pSA-1和pSA-2,都是小质粒。上述质粒全质粒测序及拼接后大小分别为8,237bp和6,250bp。质粒pSA-1含有四环素耐药基因tet(M)和多药耐药基因cfr;质粒pSA-2含有大观霉素耐药基因spd和红霉素耐药基因erm(C)。质粒pSA-1的骨架是复制蛋白编码基因repU-tet(M)-pre/mob-cfr-△pre/mob,类似的质粒骨架存在在芽孢杆菌质粒pBS-03、葡萄球菌质粒pSS-03和MRSA菌株质粒pMSA16,不同的是上述质粒中携带的耐药基因分别是aadY,erm(C)和erm(A)。质粒pSA-2的骨架结构为repN-spd-erm(C)-rec,和质粒pDJ91S骨架高度一致。一般来说,pDJ91S及类似质粒的序列是小于5Kb的片段。需要说明的是,erm(C)插入到pDJ91S repN-spd与rec之间,形成一个大于5Kb的质粒。【结论】cfr和tet(M)或者spd和ermC携带不同的耐药基因,共定位于葡萄球菌小质粒上,提示细菌在适应复杂抗生素选择压力下,根据不同的外部环境,进行选择组合,从而能够更好的适应外部环境。更多还原