动物源食品中11种苯并咪唑类药物残留免疫检测方法的研究

【作者】 郭玲玲； 刘丽强； 匡华； 胥传来；

【机构】 江南大学；

【摘要】 【目的】苯并咪唑类药物(BZs)是以苯并咪唑环为母体的一类有机杀菌剂,广泛应用于动物寄生虫的治疗。大量研究资料表明,当高剂量或较长时间使用该类药物时,会使实验动物表现出致畸、致突变以及胚胎毒性等。目前,苯并咪唑类药物已被列入《中华人民共和国动物以及动物源食品中残留物质监控计划》。为保证人体健康,提高动物源食品检测的国际竞争力,必须建立一种快速、有效、高通量的动物源食品中并苯咪唑类药物残留的检测方法。【方法】该研究选用苯并咪唑类结构类似物2-甲氧基羰基氨基-1,H-苯并咪唑-6-羧酸(Hapten)作为半抗原,采用活化酯法(EDC/NHS法)与钥孔血蓝蛋白(KL且)偶联、透析后得到免疫原Hapten-KLH,与牛血清蛋白(BSA)偶联、透析得到包被抗原Hapten-BSA;将免疫原与弗氏佐剂等体积乳化免疫BALB/c小鼠,四次免疫后,采血检测,选取效价高且抑制好的小鼠进行细胞融合;经过HAT筛选、三次亚克隆以及间接竞争酶联免疫吸附法(ic-ELISA)检测,得到纯种细胞系;将该细胞扩大培养,经过腹水制备以及纯化等步骤,得到BZs单克隆抗体;最后,用直径为20nm的纳米标记BZs抗体,利用纳米溶液的可视性以及抗原抗体的特异性反应,建立将检测BZs的胶体金免疫层析试纸条法;可通过肉眼观测和手持试纸条读数仪,分别对牛奶中BZs进行半定量和定量检测。【结果】该单克隆抗体可同时识别阿苯达唑、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜、芬苯达唑、芬苯达唑砜、氟苯达唑、甲苯达唑、帕苯达唑、奥芬达唑、氧苯达唑和多菌灵等11种BZs抗球虫药物;通过肉眼观测,该试纸条在牛奶中的消线值分别是25、6.25、12.5、12.5、50、25、50、50、50、6.25和25 ng/ml;通过试纸条读数仪检测,该试纸条在牛奶中的检测值分别为0.83、0.77、1.83、0.98、7.67、3.50、3.96、5.71、0.92、0.59和1.69 ng/ml。【结论】该方法具有简单、快速、低成本、检测结果可视性等优点,可用于牛奶中11中BZs药物残留的快速筛查检测。更多还原