饲料原料中酸溶性蛋白质的测定方法研究

【作者】 王金荣； 徐光飞； 赵银丽； 苏兰利； 胡凯飞； 李溪；

【机构】 河南工业大学生物工程学院；

【摘要】 溶性蛋白质是指能够溶于三氯乙酸溶液的一些小分子蛋白水解物,主要包括游离氨基酸和小肽分子。本实验通过优化酸溶性蛋白质的提取条件,以酸溶性蛋白质含量为指标,建立饲料原料中酸溶性蛋白质的测定方法。实验采用常规饲料原料包括玉米粉、DDGS、豆粕、膨化大豆、膨化豆粕和膨化玉米,通过单因素分析,对酸溶性蛋白的提取时间(5~60 min)、三氯乙酸提取液的浓度(0%~25%)以及振荡频率等进行实验,应用凯氏定氮法测定蛋白质含量,以提取得到的酸溶性蛋白质含量最高为评价指标,初步建立饲料原料中酸溶性蛋白的检测方法。首先以DDGS为基础样品,采用不同浓度的三氯乙酸溶液(0、1%、2%、3%、4%、5%、10%、15%、20%和25%)进行提取,得到的酸溶性蛋白质含量为3.59%~3.64%,不同提取液浓度获得的酸溶性蛋白质含量没有显著差异(P>0.05)。以去离子水和提取液浓度为1%、5%、10%和15%的三氯乙酸溶液进行提取5、10、30和60 min,结果发现不同提取浓度条件下,不同的提取时间对酸溶性蛋白含量均没有显著差异(P>0.05),其酸溶性蛋白含量为3.50%~3.75%。在提取过程中,采用摇匀后静置及振荡提取,得到的酸溶性蛋白含量为3.46%~3.78%,没有显著差别。通过上述单因素试验,饲料原料中酸溶蛋白的检测方法为:1%三氯乙酸作为提取液,摇匀后静置5 min过滤,取滤液用凯氏定氮法测定蛋白质的含量。根据此方法对玉米粉、豆粕、膨化大豆、膨化豆粕和膨化玉米由进行酸溶性蛋白的测定,结果分别为0.69%、4.51%、2.84%、4.00%和0.67%。由于本实验采用DDGS作为分析条件筛选的样品,DDGS为发酵产品,其水溶性蛋白水解物与三氯乙酸的浓度、提取时间及是否振荡提取均没有显著的相关性。但对于豆粕、玉米等常规饲料原料,其小分子蛋白、小肽等存在状态与DDGS可能存在差别。另外由于本方法测定的实验样品及数据有限,还有待于更多的饲料原料对该方法进行验证。更多还原