苜蓿多糖对小鼠脾脏B淋巴细胞的免疫调控机制

【作者】 解玉怀； 王丽雪； 杨维仁； 张桂国；

【机构】 山东农业大学动物科技学院；

【摘要】 本试验采用小鼠脾脏B淋巴细胞体外培养模型,研究了苜蓿多糖(APS)对B细胞增殖和IgM分泌的膜受体与细胞信号通路的影响,旨在探索APS的细胞免疫调控机制。1)体内试验,将32只4周龄雌性昆明鼠随机分为4个处理,每个处理8只,分别饲喂基础饲粮和含量为1.5、3、6 mg/kg的APS饲粮,每3天称重一次,36天后得出生长曲线。结果表明,3 mg/kg APS处理组生长速度较对照组有提高的趋势(P>0.05),而6 mg/kg APS处理组小鼠生长速度显著受阻(P<0.05),表现出APS免疫调控的双向调控效应。2)体外试验,体外培养小鼠脾脏B淋巴细胞,用LPS和不同浓度的APS刺激B细胞,检测细胞增殖活性和IgM分泌水平。结果表明,LPS或APS均能显著提高小鼠脾脏B淋巴细胞的增殖活性,10μg/mL的APS促增殖效果最佳(P<0.01);使用定量溶血分光光度法检测其对IgM分泌水平的影响,发现10μg/mL的APS可显著提高IgM分泌水平(P<0.01),证明APS可提高B细胞的免疫功能,并存在调控的时间依赖性和剂量依赖性。在APS激活B细胞膜受体和上游信号通路试验中,阻断试验发现,TLR4受体阻断组IgM分泌水平显著低于未阻断组(P<0.01),证明TLR4为APS结合B细胞的主要膜受体。RT-PCR检测到APS对TLR4及其介导的信号通路上主要元件MyD88、IRAK1和TRAF6的基因表达水平无显著影响,Western Blot检测到APS对TLR4(P<0.05)、MyD88(P<0.01)及IRAK1(P<0.01)蛋白表达水平有显著促进的作用;对TRAF6蛋白表达有促进的趋势(P=0.057)。在APS激活小鼠脾脏B细胞下游信号通路试验中,阻断试验显示MAPKs与NF-κB通路未阻断组IgM分泌水平显著高于阴性对照组(各通路均阻断)(P<0.01),证明MAPKs与NF-κB均为APS激活B细胞的下游通路,其中MAPKs为主要的信号转导通路;且p38通路未阻断组IgM分泌水平要显著高于其他处理组(P<0.01),证明p38信号通路是MAPKs的主要信号通路。WesternBlot检测APS对下游通路主要元件p38、ERK1/2(p42,p44)、JNK(p46,p54)和总蛋白及其磷酸化水平和NF-κB含量结果表明,APS能够提高p38(P<0.01)、ERK1/2(P<0.01)、JNK(P=0.051 8)总蛋白表达量,并显著提高磷酸化水平(P<0.01)。综上结果可知:APS的免疫调控存在双向调控效应;TLR4被证明是APS结合B淋巴细胞的主要膜受体;MAPKs与NF-κB均为APS激活B细胞的信号通路,以MAPKs为主要信号通路,且p38为MAPKs的主要信号转导通路。更多还原