一种新的鸭Cathelicidin抗菌肽的克隆及其抑菌机制

【作者】 高伟； 李丹； 朱健； 刘超群； 陈惠娴； 冯兴军；

【机构】 东北农业大学动物科学技术学院；

【摘要】 Cathelicidins家族抗菌肽广泛存在于多种动物体内,在动物体内发挥多种生物学功能。本试验根据禽类Cathelicidins家族抗菌肽基因cDNA 5′端的保守序列,结合利用3′RACE-PCR方法,从绍鸭体内首次克隆获得了一种鸭Cathelicidin抗菌肽dCATH-1的cDNA序列,构建了dCATH-1的系统发育树,研究了dCATH-1的体外生物学活性,利用内外膜通透性、内膜去极化、扫描与透射电子显微镜等试验方法,研究了dCATH-1对细菌细胞膜的作用机制。dCATH-1的cDNA全长441 bp,编码146个氨基酸前体肽,由17个aa的信号肽、109个aa的cathelin域和20个aa的成熟肽组成。dCATH-1前体肽与其他禽源的Cathelicidins具有较高的同源性,但成熟肽dCATH-1差异较大。CD圆二色谱表明dCATH-1以α螺旋结构为主。具有广谱抑菌活性,对测试菌平均MICs为4μmol/L,具有良好的盐离子和热稳定性,但酶稳定性稍弱。dCATH-1具有一定的溶血活性及细胞毒性,10%胎牛血清能够显著降低其溶血活性。dCATH-1的抑菌作用靶点主要集中在细菌细胞膜上,能够破坏细胞膜的完整性,改变内外膜的通透性,使胞内物质外流,从而达到杀死细菌的目的。更多还原