锦鲤疱疹病毒(KHV)保存方法的筛选与比较

【作者】 李莹莹； 郑树城； 曾伟伟； 王英英； 潘厚军； 刘春； 石存斌； 吴淑勤； 王庆；

【机构】 中国水产科学研究院珠江水产研究所农业部渔药创制重点实验室广东省水产动物免疫技术重点实验室；

【摘要】 探讨合适的锦鲤疱疹病毒（Koi Herpesvirus KHV）保存方法,促进KHV流行病学调查与防控以及疫苗开发等相关工作的开展。方法比较了5种不同保存条件对锦鲤疱疹病毒的影响,包括1):-80℃超低温保存;2):液氮超低温保存;3):50%磷酸甘油缓冲液保存;4):乙醇保存;5):异丙醇保存。结果表明5种方法保存的患病锦鲤组织利用PCR检测都为阳性;组织匀浆后感染健康锦鲤,保存在50%磷酸甘油缓冲液、乙醇和异丙醇的患病组织失去了感染能力,而保存在-80℃超低温冰箱和液氮中的组织均可以使健康锦鲤感染KHV;将5种保存方法保存的组织匀浆后感染CCB细胞,只有保存在50%磷酸甘油缓冲液中的患病鱼组织可以感染CCB细胞。此外,将细胞病毒液存放于4℃冰箱、-20℃冰箱中病毒感染力(TCID₅₀/0.1mL)显著下降（P<0.05）,而将病毒液存放于-80℃超低温冰箱、液氮中病毒的感染力无明显差异（P>0.05）。可以利用-80℃超低温、液氮超低温长期保存患病组织病料和细胞病毒液,而保存在50%磷酸甘油缓冲液的组织病料有利于进行病毒的细胞分离。更多还原