非洲鸵鸟BAFF蛋白的原核表达与纯化

【作者】 杨克礼； 宋卉； 刘华珍； 彭克美； 肖珂； 黄海波； 孙鹏鹏； 王静；

【机构】 华中农业大学动物医学院； 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所；

【摘要】 B细胞刺激因子(B cell activating factor,BAFF)是肿瘤坏死因子家族中的主要成员之一,是具有维持B细胞功能稳定作用的重要细胞因子。BAFF可使尚未完全成熟的B细胞分化成更加成熟的B细胞,延长B细胞的存活、促进抗体的产生,BAFF因其在B细胞发育及自身免疫病中起非常重要的作用而日益受人关注和重视。本研究根据前期克隆获得的非洲鸵鸟BAFF基因序列设计特异性引物,分别在上、下游引物中加入EcoR I和HindⅢ酶切位点,成功扩增出非洲鸵鸟BAFF基因后,将该基因片段克隆至pET-28a原核表达载体;PCR、酶切鉴定结果表明成功构建了阳性重组表达质粒pET-OsBAFF。将该重组质粒转化入大肠杆菌Rosetta(DE3)中,经IPTG诱导表达,将表达产物进行SDS-PAGE电泳分析、Western blotting验证,最终确定该重组蛋白大小为32.2 kD。该蛋白生物学活性好、纯度高,为探讨非洲鸵鸟BAFF作为B淋巴细胞生长促进剂和免疫增强剂等潜在用途奠定了基础。更多还原