玻璃化冷冻对小鼠卵母细胞及透明带超微结构的影响

【作者】 卢俊求； 张超凡； 薛玉环； 左芙蓉； 张艺钟； 成俊萍； 王晓丽；

【机构】 广西大学动物科学技术学院； 广西壮族自治区人民医院生殖医学与遗传中心；

【摘要】 为了探求对小鼠卵母细胞影响较小的玻璃化冷冻液配方,研究玻璃化冷冻小鼠卵母细胞透明带超微结构的变化本研究选用目前应用广泛的四种冷冻保护液配方对小鼠卵母细胞进行处理,观察经冷冻保护液处理后的小鼠卵母细胞与未处理的卵母细胞的存活率、受精率、卵裂率和囊胚率,选出对卵母细胞发育潜力影响相对较小的冷冻液配方;进一步对冷冻前后及仅经冷冻保护液处理的小鼠卵母细胞透明带做电镜扫描研究其透明带超微结构变化情况。结果发现,解冻后的卵母细胞有部分出现胞质轻微固缩、破碎或过度胀大,细胞透明带脱落。数据统计分析得出,1~4组玻璃化冷冻复苏后存活率和受精率均显著低于对照组5组。3组卵裂率为65.79%,显著低于对照组(P·<0.05),其余各组无统计学差异,但均低于对照组。4组囊胚率为51.43%,显著低于5组(P<0.05),其余各组无统计学差异,但均低于对照组。1组HM+7.5%(DMSO+EG),HM+15%(DMSO+EG)+0.5mol·L-1 Su组获得86.90%存活率、69.86%受精率、74.51%卵裂率和60.53%囊胚率,卵裂率和囊胚率与对照组(82.35%,72.86%)差异不显著,并且四项检测指标均在四个实验组中名列前茅,表明此组冷冻液配方对卵母细胞发育潜力相对影响较小。选用该组冷冻液配方进行后续的实验。扫描电镜发现,对照组和毒性组大部分透明带完整的包裹卵母细胞,表面十分粗糙,呈粗网状或不规则窗孔状,孔径较大且形状清晰,透过窗孔可见多层叠加的结构。另外对照组和毒性组少量出现透明带覆盖完整,但表面较平滑,网状结构已不清晰,只见小而浅的小孔;其中毒性组中还出现透明带部分脱落的情况。冷冻组出现透明带呈熔融状,表面凹凸不平但不粗糙,窗孔基本不可见。电镜结果显示卵母细胞透明带超微结构的变化主要是由于玻璃化冷冻过程引起的。更多还原