截短猪流行性腹泻病毒N蛋白的可溶性表达及其抗原活性

【作者】 朱卫霞； 袁万哲； 李丽敏； 宋勤叶； 李潭清；

【机构】 河北农业大学动物医学院河北省兽用生物制品工程技术研究中心；

【摘要】 (目的)应用原核表达系统表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白,明确其抗原活性。(方法)通过RT-PCR扩增截短的PEDV N蛋白(truncated N protein,tN蛋白)基因;构建包含tN蛋白基因的原核表达质粒(pET32α-PEDV-tN),将质粒转化E.coli BL21感受态细胞,诱导表达目的蛋白;通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定重组tN蛋白的表达及其免疫反应原性;用提纯的tN蛋白皮下接种Blab/c小鼠,通过ELISA和免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)检测重组tN蛋白的免疫原性。(结果)应用RT-PCR扩增到了预期705bp的tN蛋白基因;在E.coli BL21内,携带tN蛋白基因的重组质粒能够以可溶性表达形式诱导表达重组tN蛋白;该蛋白在体外可以与猪抗PEDV抗体特异性结合,能够诱导小鼠产生特异性抗体。(结论)应用原核表达系统实现了截短猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白的可溶性表达,该蛋白具有良好的完全抗原活性。更多还原