坡柳(Dodonaea viscosa L.)丛枝植原体新病原的分子鉴定

【作者】 笈小龙； 吴育鹏； 谢慧敏； 余乃通； 王健华； 张秀春； 刘志昕；

【机构】 中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室；

【摘要】 从四川攀枝花杧果园中表现为丛枝、小叶和黄花等症状的坡柳植株发病样品中,利用植原体16S rDNA基因的通用引物R16mF2/R16mR1和R16F2n/R16R2,对发病植株总DNA进行巢式PCR检测,同时设计植原体抗原膜蛋白基因（AntMP）的保守引物AntMP-F/AntMP-R进行PCR验证。结果显示,坡柳样品巢式PCR的第一轮、第二轮DNA条带大小分别为1 400bp和1 200bp,经NCBI序列相似性比较均为植原体16S rDNA序列,GenBank登录号为KT957205和KT957206;PCR结果显示抗原膜蛋白基因大小约600bp,与目标基因大小一致。将测得的16S rDNA基因序列与GenBank数据库中登录的16SrⅠ^ⅩⅤ组植原体16S rDNA序列进行同源性比对,构建系统进化树,结果显示,四川坡柳丛枝植原体（DOVI-SC）属于16SrⅠ组（即翠菊黄花组）,与已报道的5个16SrⅠ组（AY101386,AY566302,AY389822,L33760和KP662119）同属一个组。利用iPhyClassfier在线分析软件对获得的2条植原体序列进行虚拟RFLP分析,结果显示KT957205,KT957206与16SrⅠ-B亚组植原体（GenBank accession:NC₀05303）相似度分别是1.0、0.97,归属于16SrⅠ-B亚组。本研究对引起四川坡柳丛枝的植原体病害进行检测,获取了该植原体的分子生物学信息,确定其分类地位和同源关系,为坡柳感染植原体的早期诊断和快速检测,以及防控措施的制定提供科学线索。更多还原