结核病血清学检测用噬菌体展示肽的筛选及应用研究

【作者】 杨华； 王洁； 刘忠华； 沙巍； 秦莲花； 黄晓辰； 胡忠义；

【机构】 同济大学附属上海市肺科医院；

【摘要】 目的借助噬菌体展示随机肽库技术筛选结核抗体靶向肽,对噬菌体展示肽在结核病血清学检测中的应用价值进行评估。方法采用两种策略,以分离纯化后的结核病人特异性抗体IgG为靶分子,对噬菌体展示随机肽库进行亲和筛选,通过ELISA和血清样本检测鉴定获得结核特异性抗体IgG结合肽。在获得MTB关键抗原模拟表位肽和血清抗体IgG结合肽的基础上,同步检测不同多肽与结核病人血清抗体的亲合性差异,评估不同多肽的灵敏度和特异性,获得最佳检测多肽组合。结果以结核特异性抗体IgG为靶分子,进行两种策略筛选后,共获得20种展示不同序列的单噬菌体。间接ELISA检测结果表明单噬菌体H12、TB6、TB15和TB18均与结核病人IgG具有较高的亲和力(S/N≥2.1),确定为阳性克隆。应用抗体结合肽H12、TB6、TB15和TB18,分别建立间接ELISA检测方法,对147份结核病人血清、157份对照血清的检测敏感性分别为59.9%,49.7%,45.6%,59.2%;特异性分别为95.5%、96.8%,96.2%和94.9%。对7种噬菌体展示肽E5,M2,M6,H12,TB6,TB15,TB18进行血清学检测评估,E5(敏感性54.5%,特异性91.8%),M6(敏感性13.6%,特异性93.9%),TB6(敏感性22.7%,特异性93.9%)表现出相对较高的检测价值。放大样本评估后确定E6,TB6的检测效果最好,若以E6,TB6任一种检测阳性进行统计,则敏感性可达59.8%,特异性达到89.4%。结论利用噬菌体展示随机肽库淘选获得了4个结核特异性抗体IgG结合肽,通过血清样本评估检测,显示出较好的敏感性和特异性,为以多肽为基础探索新的结核病血清学诊断方法提供了依据。更多还原